一、概述

赛默飞 Multiskan FC 是一款高性能滤光片型酶标仪，广泛应用于免疫学、分子生物学、细胞生物学、药物分析、食品检测等领域。在多种检测模式中，定量分析（Quantitative Analysis） 是最常用且最重要的功能之一。
定量分析的核心在于通过测量样品在特定波长下的吸光度（OD 值），并与标准曲线进行比较，从而推算出样品中目标物质的浓度。Multiskan FC 结合高稳定性光学系统、精准的信号采集与分析软件，可以高效、可靠地完成各种定量实验，包括蛋白质浓度测定、核酸浓度检测、ELISA 定量检测等。

二、定量分析的原理

定量分析基于 比尔-朗伯定律（Beer-Lambert Law）：

$$A=\epsilon \cdot b\cdot c$$

其中：

• A：吸光度（Absorbance）

• ε：摩尔消光系数

• b：光程（通常为微孔板底厚对应的光程）

• c：样品浓度

在 Multiskan FC 的检测中：

1. 光源发出的光通过滤光片选择特定波长照射样品。

2. 样品溶液对光的吸收与其浓度成正比。

3. 探测器测得透射光强度并计算吸光度值。

4. 软件将样品的吸光度与标准曲线对照，计算浓度。

三、定量分析的适用实验类型

1. ELISA 定量检测

• 应用：检测血清、组织匀浆中的抗原或抗体浓度。

• 特点：使用标准品建立标准曲线，通过四参数拟合（4PL）或五参数拟合（5PL）计算浓度。

2. 蛋白质浓度测定

• 方法：Bradford 法、BCA 法、Lowry 法等。

• 波长：常用 562 nm（BCA）、595 nm（Bradford）等。

3. 核酸浓度测定

• 测定 DNA、RNA 在 260 nm 波长下的吸光度。

• 260/280 比值可判断纯度。

4. 酶活力测定

• 监测底物消耗或产物生成的速率，并根据标准曲线计算酶活力。

5. 食品与环境分析

• 检测食品中添加剂、农残、重金属等的浓度。

四、Multiskan FC 定量分析功能特点

1. 高精度光学检测
   高稳定性卤素灯光源，搭配精密滤光片，保证吸光度测量的线性与重复性。

2. 多波长检测
   支持单波长与双波长检测，双波长模式可扣除背景干扰，提高精度。

3. 可视化板孔布局
   在软件中预先定义标准孔、样品孔、空白孔，自动关联计算。

4. 多种曲线拟合算法
   支持线性回归、二次多项式、四参数逻辑（4PL）、五参数逻辑（5PL）、对数回归等。

5. 自动计算与导出
   采集完成后，软件自动生成浓度结果和标准曲线，并可导出为多种数据格式。

五、定量分析的实验流程

1. 准备标准品与样品

• 按梯度稀释法配制一组已知浓度的标准溶液。

• 准备待测样品，必要时进行稀释处理。

2. 加样与反应

• 将标准品和样品分别加到微孔板对应孔位。

• 加入显色底物，进行反应。

3. 设定板孔布局

• 在 Multiskan FC 软件中定义每个孔的类型（空白、标准、样品）。

4. 选择检测波长

• 根据试剂显色特性选择最佳波长，如 TMB 显色常用 450 nm。

• 若需背景校正，可添加参考波长。

5. 进行测量

• 仪器按预设模式采集吸光度数据。

6. 生成标准曲线

• 软件根据标准孔的吸光度值绘制曲线并进行拟合。

7. 计算浓度

• 样品浓度由曲线拟合方程计算得出。

8. 结果导出与报告

• 导出浓度结果、吸光度数据和曲线图，用于报告或进一步分析。

六、数据处理与标准曲线拟合

Multiskan FC 软件提供多种拟合方式：

1. 线性回归
   适用于低浓度范围、反应呈线性关系的实验。

2. 二次多项式拟合
   当反应曲线有轻微弯曲时可提高拟合精度。

3. 对数回归
   适合反应呈对数变化的情况。

4. 四参数逻辑（4PL）拟合
   常用于 ELISA，适合典型 S 型曲线。

5. 五参数逻辑（5PL）拟合
   对不对称 S 型曲线有更高的拟合准确度。

软件会显示拟合曲线、方程及 R² 值，并可直观对比不同拟合方法的效果。

七、影响定量分析准确性的因素

1. 光学系统稳定性
   光源衰减、滤光片老化会导致吸光度测量偏差。

2. 样品与试剂质量
   样品浑浊、气泡、试剂变质都会影响信号。

3. 标准曲线范围与梯度
   范围过窄会限制检测灵敏度，梯度设置不合理会影响拟合精度。

4. 温度与反应时间
   显色反应对温度敏感，时间控制不当会影响吸光度稳定性。

5. 板型与耗材
   微孔板材质、底部平整度及透光率会影响检测结果。

八、优化定量分析的策略

1. 定期校准
   使用标准板或标准溶液校准吸光度读数，确保线性准确。

2. 选择合适拟合算法
   根据实验反应曲线形态选择最佳拟合模型。

3. 减少外界干扰
   避免强光直射，保持仪器内部清洁。

4. 重复检测
   每个样品至少双孔重复，计算平均值减少偶然误差。

5. 优化标准曲线
   标准品浓度覆盖样品浓度区间，并保证浓度梯度均匀。

九、定量分析的应用案例

1. 血清 ELISA 检测
   通过 4PL 拟合建立标准曲线，检测抗体滴度，精度高且批间差小。

2. 蛋白定量
   BCA 法检测 20–2000 μg/mL 蛋白，线性拟合 R² ≥ 0.99。

3. 核酸纯度监测
   检测 DNA 样品 260/280 比值在 1.8–2.0 范围内为高纯度。

4. 环境水质分析
   使用显色剂检测重金属浓度，结果与化学滴定法高度一致。

十、未来发展趋势

随着检测技术与数据分析的不断进步，Multiskan 系列的定量分析功能将向以下方向发展：

• 自动波长优化：根据样品光谱自动选择最佳波长。

• 实时曲线拟合：检测过程中实时计算浓度并显示。

• 云端数据处理：实验数据自动上传分析，支持多用户协作。

• 与自动化平台集成：与机械臂、加样系统配合实现全自动定量检测。

十一、总结

赛默飞 Multiskan FC 的定量分析功能，凭借高精度光学系统、灵活的软件功能和多种拟合算法，为科研和检测提供了稳定可靠的定量解决方案。无论是 ELISA、蛋白质浓度测定、核酸检测，还是其他显色法分析，通过科学的实验设计、合理的板孔布局和优化的数据处理方法，都能发挥其定量分析的最大优势，获得准确、可重复的实验结果。