赛默飞酶标仪Multiskan Ascent使用方法详解

一、设备简介

Multiskan Ascent是Thermo Fisher Scientific公司推出的一款多功能、智能化吸光度检测仪器，广泛应用于生命科学、药物研发、临床诊断等领域的微孔板检测。该设备主要用于测量酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白定量、酶活性分析、细胞毒性评估等实验中的光密度（OD）值，是实验室中不可或缺的高通量检测工具。

Multiskan Ascent支持96孔和384孔标准微孔板，搭配Ascent软件进行实验设置、自动读板、数据分析和导出，具有结构紧凑、读数快速、波长灵活、操作简便等优点。

二、使用前准备

1. 环境要求

• 温度范围：15°C–35°C

• 湿度范围：10%–85%（无冷凝）

• 避免环境因素：仪器应远离阳光直射、高温区、强磁场、潮湿或震动源

• 通风与稳固性：放置于稳固工作台面，保持四周通风良好

2. 电源与接口检查

• 电压范围：AC 100–240V，50/60Hz

• 插座须带有接地功能

• 数据线（USB或RS-232）连接至电脑，并确保稳固

3. 软件系统启动

• 打开控制电脑，启动Ascent软件

• 软件自动识别仪器型号，如未识别，检查数据接口或重启系统

• 确保操作人员使用有管理权限的账户，避免文件保存失败

4. 板型与样品准备

• 使用标准96孔或384孔微孔板

• 加样体积一致，避免孔底产生气泡

• 孔板底部应干燥、清洁，无液体残留或指纹印痕

• 记录样本排布图（孔位对应关系），便于数据标注与分析

三、标准操作流程

步骤一：新建实验方案

1. 启动Ascent软件，点击“新建协议”；

2. 选择孔板类型（96孔或384孔）；

3. 设置检测波长：主波长（如450 nm），可选参比波长（如620 nm）；

4. 设定读取模式：单波长或双波长；

5. 设置孔位布局：标记标准品孔、空白孔、样本孔；

6. 配置读取速度、光源强度（如适配高吸收样本）；

7. 保存实验模板，便于后续调用与复用。

步骤二：插入微孔板

1. 点击“打开托盘”按钮，托盘自动弹出；

2. 将微孔板轻放于托盘中，确认方向正确（A1孔朝向仪器内部）；

3. 确保孔板与托盘接触良好，无倾斜或松动；

4. 点击“关闭托盘”，自动归位。

步骤三：开始读取数据

1. 点击“开始读取”；

2. 仪器开始依次扫描孔板各孔；

3. 软件实时显示每孔OD值，读取时间取决于板型和读取速度（96孔板约10–20秒）；

4. 读取完成后，托盘自动弹出，可取出微孔板。

步骤四：查看与处理数据

1. 在软件中查看各孔原始OD值；

2. 自动计算平均值、标准差、CV（变异系数）；

3. 若设置标准曲线，系统将自动拟合浓度；

4. 可根据设定选择线性、对数、4参数拟合等分析模型；

5. 查看结果表格与标准曲线图。

步骤五：导出与保存数据

1. 点击“导出数据”；

2. 可选格式：Excel（.xls）、CSV、文本（.txt）、PDF等；

3. 设定文件命名与保存路径，建议使用标准命名（如：项目名_日期）；

4. 可配套导出分析图表和实验参数设置报告。

四、操作结束后的处理

1. 清理工作

• 擦干孔板托盘中的残液，清除样品溅出物

• 使用无尘布或镜头纸擦拭仪器面板与光学窗口

• 关闭仪器电源和软件程序

• 盖上防尘罩，保持环境干燥清洁

2. 数据归档

• 将导出数据备份至实验室服务器或本地存储

• 整理实验编号、样本信息、孔位分布、标准曲线设定等元数据

• 若涉及GLP或ISO质量体系，应同步填写实验记录表和使用日志

五、注意事项

1. 微孔板孔底必须无水迹、无划痕，否则影响透光性；

2. 加样体积必须一致，避免产生误差；

3. 操作时保持手部干燥，避免水汽进入仪器；

4. 禁止在通电状态下进行维护清洁；

5. 禁止使用非标准规格孔板；

6. 每周清洁光学窗口与板托，防止数据偏移；

7. 出现软件报错时勿强制关机，应先退出软件再关闭电源；

8. 定期校准设备，确保光密度读数的准确性和线性范围稳定。

六、常见问题与处理建议

七、数据分析建议

1. 使用双波长检测（如450/620nm）可有效去除背景噪音；

2. 标准曲线建议设置至少5个梯度浓度，分布均匀；

3. 实验重复设置≥3孔，确保统计学意义；

4. 对于吸光度高于3.5 OD的样本，应稀释重新检测；

5. ELISA实验建议空白孔读数控制在0.05以下为宜；

6. 标准曲线R²应≥0.98，若偏离应检查样本准备或读取误差。

八、安全与维护建议

安全须知

• 所有操作应在断电状态下进行维护；

• 使用后务必清理托盘、光学窗口，防止液体腐蚀；

• 禁止自行拆卸光学系统、电机、主板等内部模块；

• 遇突发状况（冒烟、异响）应立即切断电源并报修。

日常维护建议

九、总结

Multiskan Ascent是一款高性能、易操作的吸光度测定平台，广泛适用于科研、临床与工业实验室。掌握标准使用流程是确保实验结果准确、数据一致性良好、设备运行安全高效的前提。

通过科学设定参数、合理分配孔位、规范加样操作和系统的数据分析流程，操作者可以充分发挥该设备的精度与效率。同时，配合日常清洁与定期维护，可显著延长设备寿命，减少故障率，降低运营成本。

建议将本指南作为实验室内部标准操作文档存档，结合实际实验类型灵活应用，并定期组织相关人员进行使用培训与评估，提升整体实验质量与工作效率。