赛默飞酶标仪Multiskan EX实验设置

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一、Multiskan EX酶标仪概况

Multiskan EX 是一款经典型微孔板酶标仪，适用于96孔板和部分可适配的384孔板检测。广泛应用于：

酶活性测定
ELISA反应终点分析
细胞活力检测
动力学反应过程监控

其具备稳定的光学系统、灵敏度高、波长覆盖广（340~850 nm）、可自定义程序设置，是各类比色法实验的重要平台。

二、实验设置基础结构

在开展实验前，需明确以下五个要素：

检测方式：终点法（End-point）、动力学法（Kinetic）、扫描法（Spectral scan）；
孔板类型：标准96孔板是默认设置；
波长选择：依据底物种类选择适配波长；
读取模式：单波长、双波长（用于背景扣除）；
数据处理方式：原始值、平均值、差值、比值、斜率等。

三、软件设置界面结构（以Ascent Software为例）

Multiskan EX 配套使用的 Ascent Software（或 SkanIt 旧版）界面分为：

实验设置模块（Experiment Setup）
孔位布局定义（Plate Layout）
测定参数配置（Measurement Settings）
结果输出格式定义（Results Output）
运行控制与数据导出（Run & Export）

这些设置共同构成了一套完整的实验控制流程。

四、实验模式设置详解

1. 终点法（End-point）

最常见用于 ELISA、MTT、BCA 等反应。

设置要点：

波长选择：如 TMB 显色常用 450 nm，MTT 用 570 nm；
读取方式：可选单波长或双波长校正（如450/620 nm）；
读取速度：标准为“Normal”或“Fast”，Fast模式读取更快但信噪比略低；
孔板布图：定义空白孔（Blank）、标准孔（Standard）、样品孔（Sample）；
背景扣除：选择“Blank subtraction”自动减去背景孔值。

2. 动力学法（Kinetic）

用于实时反应过程监测，如酶动力学、细胞代谢等。

设置要点：

检测总时间：如30分钟、60分钟；
时间间隔：根据反应速度设置为10秒～1分钟；
起始延时：设为10~30秒，用于加样完成后反应稳定；
输出格式：生成“时间–吸光度”数据矩阵，可用于曲线拟合或斜率分析；
温度控制：设备不具备控温功能，实验环境温度应稳定。

3. 多波长扫描（Spectral Scan）

用于选择最合适检测波长或观察吸收峰。

设置要点：

波长范围：如340–800 nm；
步长：通常为1~10 nm；
读取孔位：通常选择代表性孔；
用途：选择最佳波长、分析反应光谱特征。

五、板型与孔位布局设置

1. 板型选择

默认支持标准96孔板（12×8排布），部分软件支持自定义设置其他类型板（如48孔、384孔）。

2. 孔位功能定义

空白孔（Blank）：通常为反应体系中不含底物或酶的孔，用于背景扣除；
标准孔（Standard）：含已知浓度标准品，用于绘制标准曲线；
样品孔（Sample）：待测样本；
对照孔（Control）：阳性或阴性对照；
重复孔：建议每组设置3个以上重复以增强统计可靠性。

3. 复制方式

可设置“Row copy”或“Column copy”将设定模式快速应用到整板；
使用“Apply Layout”功能自动铺设布局。

六、实验设置具体流程示例

以“终点法ELISA检测”为例，详细说明设置流程。

Step 1：新建实验模板

打开软件 → File → New Experiment → 命名并保存

Step 2：设置波长参数

Measurement Settings → Select Wavelength → 450 nm（主波长）
若需背景扣除，添加 620 nm 为参考波长 → 选择“Dual wavelength reading”

Step 3：设定读取参数

读取速度：Normal
读取模式：Horizontal or Vertical
震荡设置：根据需要设定摇板时间（如10s）

Step 4：设定孔位功能

A1~A3：空白孔
B1~B6：标准品（不同浓度）
C1~H12：样本孔及重复

Step 5：数据处理设置

Output Options → Absorbance, Mean, SD
选择“Subtract blank values”
可添加标准曲线计算（如线性、4PL、Logit-log）

Step 6：保存模板，准备运行

点击“Save & Run” → 将准备好的板放入 → 点击“Start”开始读取

七、实验模板举例

应用类型	推荐波长（主/副）	检测模式	特殊设置
ELISA（TMB）	450/620 nm	终点法	设置4PL标准曲线拟合
MTT法	570/690 nm	终点法	加入背景扣除
酶促反应	405 nm	动力学	设定每分钟读取一次
细胞毒性检测	490/630 nm	终点法	设置双波长读取
药物释放实验	600 nm	动力学	设置长时间、低频读取

八、数据导出与处理建议

1. 数据导出格式

通常支持.csv、.xls、.txt等格式；
可选择“Raw Data”、“Processed Data”、“Standard Curve”等模块输出；
自动保存路径可设定为本地或实验网络服务器。

2. 后期数据处理建议

使用Excel、GraphPad Prism或R软件对原始OD值进行处理；
建立标准曲线计算浓度（建议标准点数≥6）；
进行组间统计检验（t检验、ANOVA）；
可进一步绘制动态反应曲线、热图、相关分析图等。

九、常见设置错误与排查方法

错误表现	可能原因	排查建议
吸光度数值异常	波长选择错误、孔内有气泡	检查底物反应峰、移液操作是否规范
无法读取孔位	板未放正、盖板未取下	重新放置孔板并确保光路畅通
软件提示读取失败	波长灯老化、光源未启动	联系设备工程师或更换光源模块
标准曲线不拟合	标准浓度误差大、曲线模型设置错误	检查浓度设定、尝试不同曲线拟合方式
同一组间重复差异大	移液不准、边缘效应、温度不均	使用多道移液器、避开板边孔