赛默飞酶标仪Multiskan EX使用方法

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赛默飞酶标仪 Multiskan EX 使用方法详解

一、设备概述

Thermo Scientific Multiskan EX 酶标仪是一款多功能微孔板读数仪，适用于酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白定量、生物活性测定、细胞增殖与毒性分析等广泛的实验需求。该设备采用滤光片式光学系统，能准确测定96孔或384孔板中样品的吸光度，是现代实验室中不可或缺的基础仪器之一。

Multiskan EX 以其操作简便、波长选择灵活、读数稳定、兼容性强等优势，在科研、临床、生物制药等多个领域被广泛采用。本文将从结构组成到具体操作全方位介绍其使用方法，帮助用户快速掌握设备使用流程，提高实验效率和数据可靠性。

二、主要结构与配置

2.1 外部结构

主机主体：包括样本舱、光学系统、滤光轮、电源接口等部分；
控制面板（部分型号）：提供本地手动控制功能；
通信接口：一般为串口或USB，用于连接上位机；
微孔板载入槽：支持标准96孔、可选支持384孔板型；
状态指示灯：显示设备运行状态、故障报警等信息。

2.2 光学系统

光源：钨卤素灯，提供宽谱可见光；
滤光片系统：机械转轮最多支持8个滤光片，更换方便；
光电检测器：单光束检测，响应灵敏，数据稳定。

2.3 软件系统

配套软件为 Thermo Ascent Software，具备以下功能：

波长设定
读板模式选择（终点法、动力学法）
板型设置与孔布局设计
数据处理（平均值、标准差、扣除背景、比值计算等）
导出与打印实验报告

三、开机与连接步骤

3.1 启动设备

插上主电源线，开启酶标仪电源开关；
等待设备自检完成，状态指示灯常绿表示准备就绪；
打开上位机，启动 Ascent 软件；
检查连接状态，确保软件与酶标仪成功通信（若无法连接请检查串口设置或驱动安装）。

3.2 软件主界面导航

Ascent 软件主界面通常包括：

Menu 菜单栏（新建、保存、导入模板等）；
Protocol 设置区（波长、模式、时间等）；
Plate Layout（孔布局）；
Data View（读数结果）；
Graph Analysis（可视化曲线图）；
Export/Print（数据导出或打印报告）。

四、实验设置操作步骤

4.1 新建实验协议

打开软件，选择“New Measurement Protocol”；
命名实验文件，设置板型（96-well）；
进入参数设置界面。

4.2 波长设定

点击“Add Wavelength”添加检测波长（如450 nm）；
选定参考波长（如620 nm）可提高检测准确性；
确保设备当前安装有所选波段的滤光片。

4.3 读数模式设定

选择 End-point（终点法）适用于 ELISA 类实验；
选择 Kinetic（动力学法）适用于酶活或反应速率分析；
设置摇板时间、读取延迟时间、读取间隔（如适用）；

4.4 板型布局设置

进入“Plate Layout”界面；
标记空白孔、阴性对照、阳性对照和样品孔；
可设置自动平均、多孔计算等分析指令。

五、实验读数与数据采集

5.1 加样完成插入板

确认微孔板无气泡，底部干净无污染；
插入样本板，盖子朝上，孔A1位于左上角；
关闭板舱门。

5.2 启动读数

点击“Start Reading”启动检测；
软件自动控制滤光片切换与光路读取；
读取过程可实时显示读数状态，动力学实验将显示曲线。

5.3 数据查看与导出

实验结束后可在 Data View 查看每孔 OD 值；
支持平均值、标准差、背景扣除、比值计算等处理；
数据可导出为 Excel、CSV、TXT 等格式；
支持生成PDF实验报告，包含板布局图、统计图表等。

六、典型应用举例

6.1 ELISA 检测

主波长：450 nm，参考波长：620 nm；
终点法读取，设定读取延迟时间10秒；
板布局中设定标准曲线与样品孔；
导出OD值并在Excel中绘制标准曲线进行定量分析。

6.2 酶活动力学检测

波长设定：405 nm；
动力学读取模式；
读取间隔：30秒，持续时间：10分钟；
软件自动绘制每孔OD变化曲线，计算反应速率。

6.3 MTT 细胞活力检测

主波长570 nm，参考波长620 nm；
终点法；
摇板时间设置10秒，确保染料充分混匀；
空白孔用于背景校正。

七、使用过程中的注意事项

波长匹配试剂：使用前务必确认试剂的最佳吸收波长，避免设错波长导致信号偏低。
防止气泡：加样后可轻拍板底或使用消泡器消除气泡。
板底清洁：孔底如有残液、指纹会严重干扰光路，影响读数准确性。
加样一致性：确保每孔加样体积与操作步骤一致，避免误差。
温度控制：尽量在恒温环境下操作，避免因环境温差造成酶反应速率差异。
光源老化检查：如OD值异常波动，应检查卤素灯是否老化或损坏。
定期维护：每季度检查一次滤光片轮是否转动灵活，定期清洁检测窗口。

八、常见问题排查与解决方案

问题	原因	解决方法
无法启动读板	通讯未连接、仪器自检失败	检查连接线和电源，重新启动软件
读数值异常偏低	波长设定错误、试剂降解	更换底物或重新设定波长
多孔读数无响应	孔内无液体或液面太低	检查孔内液体体积与位置
启动后程序卡顿	软件配置冲突或系统资源不足	关闭其他软件，重启软件
参考波长不生效	未勾选参考波长或波长无滤光片	添加并启用有效参考波长
光源闪烁	灯泡老化	更换光源灯泡