一、目的与适用范围

本文件面向需要在 Multiskan EX 平台上**规划、编写、验证与维护“检测程序”**的实验室与质量团队。目标是：

• 建立从需求定义—程序设计—验证上线—运行监控—变更控制—归档审计的闭环。

• 明确“端点/动力学”等读数模式下的程序化结构与质量要素，在不触及可执行参数的前提下，为日常与研究型测定提供一致、可审计的工作流。

二、关键术语（框架化）

• 检测程序：在酶标仪与配套软件中用于组织一次或一系列读板任务的逻辑与规则集合，包括板布局、读数模式、数据处理与判读策略、报告/导出。

• 板布局：对空白、阴阳性质控、标准品与未知样的位置编码与角色定义。

• 读数模式：端点/动力学/多波长等抽象模式的组合，不包含具体波长、时间或震荡等级。

• QC 规则：用于判断本次检测是否有效的门控条件与放行标准（以机构质量文件为准）。

• 审计追踪：对程序版本、运行事件、修改与签核的时间戳记录与可追溯链路。

三、总体架构与模块分解

1. 权限与版本管理模块

• 角色分级（设计者、审核者、操作者、审计者）。

• 程序版本号、变更原因、审批与生效范围。

2. 板布局定义模块

• 行列编码、孔位角色（空白/参比/标准/质控/未知）。

• 复孔与随机化策略（避免系统性位置偏倚）。

3. 测量策略模块

• 读数模式（端点/动力学/多波长）与测量顺序（先后、重复测量逻辑）。

• 震荡/静置与回稳的“策略占位符”（不写入可执行数值）。

4. 数据预处理模块

• 空白/参比的逻辑扣除、跨波长合成、背景与漂移修正思路。

• 复孔合并与异常值标记（统计学门限由质量文件定义）。

5. 定量与判读模块

• 标准曲线拟合策略（线性/对数线性/四参数或五参数逻辑回归等的选择规则）。

• 区间有效性、外推禁止、最小可报告区间（MRR）的合规管理。

6. 质量控制模块

• 质控品门限、跨板/跨日一致性核查、失效处置与复测分支。

7. 输出与归档模块

• 原始读数、处理中间结果、最终结果、日志与报告模板。

• 数据完整性（时间戳、签名、不可篡改导出与备份策略）。

8. 异常与应急模块

• 超限、通信、硬件自检异常的分类分级与处置流程。

四、需求澄清与立项

• 测定目标：明确读数的“物理意义”（吸光度/参比差值/多波长组合）、需要的时间分辨率与定量区间。

• 质量目标：预期的重复性/再现性、准确度与线性区间的验证方案（不写入阈值）。

• 合规目标：数据留存年限、审计字段、可追溯到操作者与装置的信息要求。

• 资源约束：板型、通量、并行度、与上位系统对接需求（LIMS、MES、电子实验记录）。

五、板布局与标识规则

• 命名体系：板号、批号、程序版本、操作者、日期与时间，以统一命名规则落地。

• 角色分配：以最小必要原则配置空白、质控与标准位置，保证统计稳健与空间均匀。

• 复孔策略：未知样与标准曲线均设置复孔位；复孔合并采用鲁棒统计（如去极值后均值或加权中位数）的原则性说明。

• 位置效应防范：边缘孔/热场差异的对冲策略（如对称分布、随机化），具体执行在 SOP 中定义。

六、测量策略（原则性）

• 端点模式：强调在既定窗口内完成读板的一致性；如涉及反应稳定期，应在程序中以“逻辑门”表述，不写具体时标。

• 动力学模式：明确采样节拍、总时长与关键时域在程序占位符中定义，实际数值由 SOP 提供；程序需支持曲线级判读与速率计算逻辑的选择。

• 多波长策略：主波长用于信号采集，辅以参比/背景位点；程序实现可配置的组合/扣除规则。

• 测量顺序：板内/板间的顺序应固定可复现，尽量减少“先后偏倚”。

• 设备交互：程序需在启动前完成设备自检结果/耗材状态/日志空间等前置门控。

七、数据预处理与清洗

• 空白与参比：以“逻辑链条”形式定义先后顺序（如：原始信号→参比校正→空白扣除→归一化），避免歧义。

• 漂移与批间效应：允许选择“同板校正”“跨板锚定”“分段校正”等策略，但必须由质量文件批准。

• 复孔处理：自动识别异常复孔（离群、饱和、低信噪），触发人工复核与合规判定。

• 数据标注：每一条数据应携带来源孔位、处理步骤、算法版本与判定标识，形成可回放的处理链路。

八、定量模型与结果计算

• 模型库：提供线性、对数线性、四参数/五参数逻辑回归、分段回归等可选模型，并允许配置拟合优度、残差结构与稳健拟合开关。

• 曲线防漂移：支持“锚定点”“内置参考”的曲线稳定策略，禁止在无依据情况下跨板外推。

• 区间与稀释逻辑：程序应内置“最小与最大可报告范围”的门控与自动稀释判定标签（具体稀释操作不在程序内实现）。

• 结果层级：原始读数→预处理数→浓度/判定值→批次统计（均值、CV、通过/不通过），层层可追溯。

九、质量控制与放行判定

• 质控位管理：在板布局中固定质控位，程序读取后以门控规则给出“本板有效/无效”的判定。

• 规则体系：支持单点、跨点、跨日的统计门限与趋势判读（如稳定性图），必要时触发锁定与复核流程。

• 再测策略：当 QC 失效或结果超限，程序自动生成再测建议与原因码，并阻止未经授权的放行。

十、运行流程与人机交互（抽象）

1. 程序选择与核对：操作者加载目标程序，系统自动拉取版本、适用范围与最近一次验证状态。

2. 前置自检：设备状态、日志容量、接口连通性、板条码/批号核对等通过才可继续。

3. 任务执行：程序按布局与测量策略推进，实时显示进度与事件日志。

4. 即时判读：端点/动力学数据滚动呈现，关键门控（QC、线性区间、异常）即时反馈。

5. 结果冻结与签核：运行结束后将原始与处理数据冻结，提交审核人电子签名；未经签核不得对外发布。

6. 报告与导出：生成包含版本、设备、时间戳、责任链的报告；导出遵循不可篡改与备份策略。

十一、异常分类与处置思路

• 数据类：整体偏移、线性劣化、复孔分歧、边缘效应；处置为暂停判读—核查 QC—必要时再测。

• 设备类：通信中断、光学/机械异常、报警事件；处置为记录事件码—通知工程师—切换备用方案。

• 操作类：程序与板不匹配、条码/批号冲突、权限越级；处置为阻断放行—走偏差流程。

• 系统类：时间同步、存储、权限数据库异常；处置为停用相关程序—IT 与质量联合排查。

十二、程序验证与维护

• 预验证：在模拟数据与验证板数据上评估程序逻辑正确性、拟合稳定性与门控有效性。

• OQ/PQ 关联：与装置层的运行/性能确认相衔接，确保程序与设备整体性能匹配。

• 定期复核：周期性检查程序输出与质量指标的吻合度，必要时小版本修订。

• 变更控制：任何修改（模型切换、门控调整、布局改动）必须立案、评估风险、审批后生效；旧版本留档可回滚。

十三、数据完整性与合规

• 审计追踪：对创建、修改、运行、签核、导出的每个动作写入时间戳与责任人。

• 只读归档：原始与处理数据、曲线参数、日志与报告按机构要求留存，采用只读介质或加密签名。

• 最小暴露：报告对外仅给出必要字段，敏感信息最小化披露并控制访问权限。

十四、信息化与系统集成

• 条码与主数据：与样本主数据/物料主数据打通，避免手输。

• LIMS/MES 对接：程序与系统间的状态同步、结果回写、异常事件推送。

• 接口稳健性：断连重传、重复提交检测、幂等策略，确保数据不丢不重。

十五、二手设备的程序化补充点

• 基线再建：在二手设备上线前，重建空板/验证板的基线图谱，以此校准程序门控的灵敏度。

• 通道一致性：程序内置跨孔一致性自检与预警，防止光路或通道个体差异影响判读。

• 备件与寿命：把光源/滤片的寿命管理纳入程序提醒（运行时长、计数与提示阈位），仅作提醒不设定数值。

十六、报告模板（示例性结构）

• 封面：项目名、程序名与版本、设备标识、操作者/审核者、日期与时间。

• 方法学摘要：读数模式、板布局角色、定量模型与 QC 规则清单（不暴露参数）。

• 结果主体：原始/处理数据摘要、曲线与残差图、QC 判定与异常说明。

• 审计页：签名轨迹、版本校验值、导出校验和。

• 附录：事件日志与原因码表。

十七、示例“检测程序蓝图”（伪代码/状态机，非指令）

csharp复制编辑State INIT:
  verify_user_role()
  load_program(version)
  check_device_selftest()  # 仅逻辑门
  goto LAYOUT_CHECK

State LAYOUT_CHECK:
  read_plate_id()
  verify_layout_roles()    # 空白/标准/质控/未知
  goto RUN

State RUN:  for each read_cycle in strategy:     # 端点/动力学占位
     acquire_raw()
     preprocess()          # 参比/空白/复孔清洗的逻辑
     if qc_guard_fail(): goto HOLD  goto ANALYZE

State ANALYZE:  fit_calibration_model()  # 线性/4PL/5PL 选择与稳健拟合  compute_results()  if release_guard_pass(): goto FREEZE  else goto HOLD

State HOLD:  flag_nonconformance()  suggest_retest_path()
  wait for reviewer_decision()  goto FREEZE

State FREEZE:  write_audit_trail()  generate_report()  export_and_backup()
  end

十八、常见误区与改进建议

• 把“能跑通”当成“可放行”：无 QC 门控、无曲线残差审查、无审计追踪，均不应放行。

• 混淆空白/参比顺序：预处理链条不清晰会导致不可逆偏差；务必在程序中显式化。

• 过度依赖单模型：面对非线性或平台效应，仍强行用单一线性模型，易产生系统性误差。

• 版本散乱：多人多版并行、命名不一、缺少签核与冻结，审计风险高。

• 数据“只看最终值”：忽视原始读数与中间处理过程，无法追责与复盘。

十九、结语

一套合规、稳健、可复用的 Multiskan EX 检测程序，不是“参数清单”，而是一整套治理方案：清晰的板布局与测量策略、严谨的预处理与定量模型、有效的 QC 门控、完善的审计追踪与数据完整性，以及严格的版本与变更控制。将这些模块化、模板化、可审计化，才能在不同项目与批次间维持结果的一致性与可信度；具体操作细节务必回归本单位 SOP 与正式技术文件，由经过培训与授权的人员执行。