一、设备概述

赛默飞（Thermo Scientific）Multiskan EX 是一款经典的酶标仪，广泛应用于生物医学研究、临床检验、食品安全检测等领域。它可以实现多波长检测、快速数据采集和高精度光学测量，适合包括 终点法检测（End-point Method） 在内的多种检测模式。

终点法检测是一种在反应完成后一次性读取反应终值的测定方法，常用于 ELISA（酶联免疫吸附试验）、蛋白定量、核酸检测等实验。该方法对仪器稳定性、光学系统精度、数据一致性有较高要求，而 Multiskan EX 在这些方面表现出色。

二、终点法检测原理

1. 光学测量原理

Multiskan EX 采用比尔-朗伯定律（Beer-Lambert Law）进行光密度（OD）测定：

A=log⁡10I0IA = \log_{10} \frac{I_0}{I}A=log10II0

其中：

• $A$：吸光度

• I0I_0I0：入射光强度

• $I$：透射光强度

在终点法中，样品在酶促反应完成后颜色稳定，此时读取的吸光度值直接与目标物浓度成比例。

2. 终点法特点

• 一次性读取：反应完成后统一测量，不记录反应过程曲线。

• 稳定性依赖高：对反应完成时刻的控制较为严格。

• 数据处理简便：直接与标准曲线比较得出结果。

三、Multiskan EX 技术参数与适用性

1. 检测波长范围

• 340 nm–850 nm，可覆盖从紫外到近红外的多数检测需求。

• 常用终点法波长：405 nm（酶反应底物如 pNPP）、450 nm（TMB 显色）、570 nm（蛋白测定）。

2. 光学系统

• 单光束系统，使用干涉滤光片选择波长。

• 光程补偿功能，减少因板型差异造成的误差。

3. 板型兼容性

• 96 孔酶标板（平底、圆底、U 型底）。

• 适配不同品牌与材质的微孔板。

4. 检测速度

• 全板读取时间约 5–10 秒，保证终点法多孔同步性。

5. 精度与重复性

• 吸光度精度 ±0.005 Abs，重复性良好。

四、终点法检测流程

1. 实验准备

• 酶标板准备：加入样品、试剂并进行显色反应。

• 终止反应：在规定时间加入终止液（如硫酸），使颜色稳定。

• 混匀：轻轻震荡酶标板，确保颜色均匀。

2. 仪器准备

• 打开 Multiskan EX，预热 15–20 分钟。

• 检查滤光片位置与所需波长是否一致。

• 打开配套软件（如 Ascent），选择终点法检测模式。

3. 参数设定

• 波长：根据实验选择（如 ELISA 常用 450 nm）。

• 读取模式：全板扫描。

• 数据输出：吸光度（OD 值）或直接计算浓度。

4. 检测执行

• 将反应完成并终止的酶标板放入载物托盘。

• 启动检测程序，仪器自动逐孔读取光密度值。

• 检测结束后，数据自动保存或导出。

五、结果分析

1. 数据处理

• 将样品 OD 值与标准曲线对应，计算浓度。

• 对重复孔取平均值，减少偶然误差。

2. 质控要求

• 阳性对照与阴性对照符合实验预期。

• 标准曲线线性相关系数 R2R^2R2 ≥ 0.99。

3. 常见结果解读

• OD 值过高：可能显色时间过长或底物浓度过高。

• OD 值过低：可能反应不充分或酶活性降低。

六、终点法检测的优势与局限

优势

• 操作简单，检测时间短。

• 适合高通量样品检测。

• 数据分析直观，便于批量处理。

局限

• 不能反映反应速率信息。

• 对反应终止时间要求严格。

• 不适用于反应速度快、颜色不稳定的体系。

七、操作注意事项

1. 时间同步

• 反应终止操作需在短时间内完成全板处理，减少时间差。

2. 温度影响

• 检测环境温度保持稳定，避免光学系统受热漂移。

3. 波长选择

• 波长应匹配底物吸收峰，确保检测灵敏度。

4. 光学维护

• 定期清洁光路窗口，避免灰尘影响透光率。

5. 微孔板质量

• 使用透明度高、底部平整的板，减少背景误差。

八、维护与保养

1. 日常维护

• 检测结束后关闭仪器电源，覆盖防尘罩。

• 定期运行校准程序，确保光学精度。

2. 周期保养

• 每 6 个月检查滤光片透光性能。

• 每年进行一次厂家或专业机构校准。

3. 存放条件

• 置于干燥、无强光直射的环境，防止光学部件老化。

九、终点法在不同检测中的应用

1. ELISA 检测

• 常用于抗原、抗体定量，波长一般为 450 nm。

2. 蛋白定量

• BCA 法（562 nm）、考马斯亮蓝法（595 nm）、Lowry 法（750 nm）。

3. 核酸定量

• 适合稳定显色的 DNA/RNA 染料检测。

4. 食品安全检测

• 检测农药残留、霉菌毒素等，通过特异性显色反应进行终点测量。

十、结语

赛默飞酶标仪 Multiskan EX 在终点法检测中凭借其高精度光学系统、快速读取能力和稳定的数据表现，为科研和检测提供了可靠保障。掌握终点法的原理、流程和操作要点，不仅能提升实验的准确性，还能延长仪器的使用寿命，提高实验室的整体工作效率。