赛默飞酶标仪 Multiskan EX 运行模式详解

一、仪器概述

Multiskan EX 是 Thermo Labsystems 推出的高性能微孔板酶标仪，广泛应用于 ELISA、细胞活性分析、蛋白质定量、核酸吸收比检测、药物筛选等实验。该设备基于分光光度法原理，采用可更换滤光片进行多波长检测，具备灵敏度高、稳定性强、操作智能等特点。

Multiskan EX 支持多种运行模式与数据读取方式，用户可根据实验类型、孔板格式和检测要求灵活设置。运行模式的灵活性正是其广泛适用于科研、临床和工业实验室的关键优势之一。

二、运行模式分类

Multiskan EX 支持的主要运行模式包括：

1. 端点法（End-point Mode）

2. 动力学法（Kinetic Mode）

3. 双波长法（Dual Wavelength Mode）

4. 空白扣除法（Blank Subtraction Mode）

5. 多波长扫描（Multi-Wavelength Mode）

6. 程序法（Programmed Protocol Mode）

7. 全板扫描法（Whole Plate Scanning）

8. 背景校正法（Reference Mode）

以下将分别进行详细解析。

三、各运行模式功能详解与应用

1. 端点法（End-point Mode）

功能说明：

端点法是最基础、最常用的运行模式，适用于大多数ELISA和固定终点颜色反应的检测。仪器在设定波长下，对每一个孔读取一次吸光度值，通常在反应终止液加入后立即开始读取。

应用场景：

• 夹心法ELISA、竞争法ELISA

• 蛋白质定量（BCA、Bradford法）

• DNA/RNA定量

• 药敏试验吸光度终点判定

参数设置：

• 波长选择（如450nm）

• 读取范围（全板或指定孔位）

• 读取顺序（Z字型或逐行）

• 加样时间间隔控制（可选）

2. 动力学法（Kinetic Mode）

功能说明：

动力学模式用于连续多次读取每个孔的吸光度随时间变化的曲线，以分析反应速率、反应动力学常数等参数，常用于酶活力分析等场景。

应用场景：

• 酶活性检测（如HRP、ALP酶动力学）

• 底物转化反应分析

• 药效时间曲线绘制

参数设置：

• 起始延时（通常设定为0–30秒）

• 读取间隔（如每15秒、每30秒）

• 总读取时间（如5分钟、10分钟）

• 温度稳定性要求较高，建议预热

输出结果：

• 每孔在每个时间点的OD值

• 动力学曲线图、最大反应速率斜率计算（软件支持）

3. 双波长法（Dual Wavelength Mode）

功能说明：

该模式使用两个波长同时读取每孔，主波长用于检测反应产物吸光度，参考波长用于校正背景、光散射或孔板本身的干扰，提高结果准确性。

应用场景：

• 使用TMB底物的ELISA（450nm主波长，630nm参考波长）

• 背景干扰显著样本检测

• 透明度不均孔板检测校正

参数设置：

• 主波长与参考波长选择

• 自动差值运算（OD1–OD2）

• 可与空白孔配合使用，进一步提升精度

4. 空白扣除法（Blank Subtraction Mode）

功能说明：

仪器可自动扣除指定孔位（空白孔）的读数作为所有样本的参考基线值，以去除试剂、孔板、溶剂等造成的非特异性背景吸收。

应用场景：

• 所有终点测定项目

• 精密度要求高的定量实验

参数设置：

• 指定空白孔位（可多个平均）

• 启用或关闭自动扣除

• 与双波长法联合使用提升结果稳定性

5. 多波长扫描（Multi-Wavelength Mode）

功能说明：

该模式允许在多个波长下顺序测量每个孔的吸光度值，用于筛选最优波长、绘制吸收谱图或对样品多组分进行分析。

应用场景：

• 分析酶标底物的最大吸收波长

• 多靶点比色反应同时检测

• 样品分光特性研究

参数设置：

• 可选择最多6个波长进行扫描

• 每个波长间自动切换读取

• 可输出吸收光谱图与峰值定位

6. 程序法（Programmed Protocol Mode）

功能说明：

用户可预设多个步骤组合成一套完整实验流程程序，包括多波长检测、时间控制、数据处理规则，适合自动化、高重复性需求场景。

应用场景：

• 标准ELISA流程自动运行

• 多阶段检测任务（预读、终点、动力学）

• 多项目实验批量运行

参数设置：

• 步骤名称及顺序

• 每步对应波长、模式、间隔时间

• 数据输出方式定义

• 支持模板保存与调用

7. 全板扫描法（Whole Plate Scanning）

功能说明：

以矩阵方式对整块微孔板进行扫描检测，用于板均匀性评估、细胞铺板质量控制或自动分区分析。

应用场景：

• 孔板均一性测试（CV值计算）

• 高通量筛选中样本分布评估

• 细胞铺板检测（铺板密度、边缘效应）

参数设置：

• 是否读取全部96孔或指定行列

• 输出全板热图、均值、偏差图

8. 背景校正法（Reference Mode）

功能说明：

系统利用内置参考光路或校正通道，对每次测量的光强变化进行基准修正，适用于长时间连续操作或环境光变化较大场所。

应用场景：

• 大批量ELISA测量

• 实验室光照或温度波动影响下使用

• 消除每日仪器状态微变带来的数据偏差

四、运行模式的组合与扩展操作

Multiskan EX 强调灵活性，多个运行模式可组合使用：

通过软件可将这些模式编排为完整的“程序模板”，一键运行、自动读取、结果归档。部分版本支持结果与标准曲线自动生成、批量导出CSV/EXCEL报告。

五、运行模式设置软件操作简述（以Ascent软件为例）

1. 选择模式类型：在Protocol编辑器中选择“End-point”或“Kinetic”等。

2. 设定波长与滤光片槽位：匹配所需波长与仪器滤光片位置。

3. 设定时间参数：如延迟时间、读取周期、总时长等。

4. 选择孔位读取范围：设定是否读取全部96孔、空白孔位置。

5. 启用数据处理选项：如空白扣除、双波长减法、结果转换等。

6. 保存为模板：便于下次直接调用使用。

六、使用建议与常见误区

建议：

• 模式选择应基于试剂盒说明书或方法标准；

• 动力学法检测应确保反应速率适中，避免超出线性范围；

• 双波长法建议主波长与参考波长差值>50nm；

• 程序法使用前应反复测试确保每个步骤逻辑正确；

• 滤光片与波长设定一一对应，避免软件与硬件不匹配。

常见误区：

七、总结

赛默飞 Multiskan EX 酶标仪运行模式设计灵活，功能完备。通过合理选择和搭配运行模式，用户可针对不同实验目标高效完成吸光度检测任务。掌握其端点法、动力学法、双波长法等核心模式的原理与操作逻辑，能显著提升实验效率与数据准确性。

建议实验室根据项目类型建立标准化的“运行模式模板库”，结合数据处理规范与仪器维护计划，最大化发挥Multiskan EX在科研与检测中的价值。