一、操作前准备

1. 环境与安全条件

• 室温保持在 20–25 ℃，相对湿度 40–60%

• 避免强光直射、强电磁干扰及高粉尘环境

• 仪器放置在平稳、无震动的工作台上

• 保证接地良好，使用符合额定电压（220–240 V AC，50–60 Hz）的独立电源插座

2. 仪器检查

• 检查电源线、通讯线（RS-232 或 USB 转串口）是否完好

• 确认滤光片组安装牢固、波长配置符合实验需求

• 检查托盘和孔板定位架是否清洁无液体残留

• 观察光源状态，确保未松动、无异常杂音

3. 软件与数据准备

• 启动配套软件（如 Ascent Software），确认与仪器通讯正常

• 备份或调用所需的实验方法模板（Method Files）

• 准备好标准品浓度表、板型布局文件

4. 样品与耗材准备

• 使用标准 96 孔微孔板（平底或圆底依实验类型）

• 样品和试剂均应达到检测所需温度（通常室温）

• 避免气泡进入反应孔，如有气泡应及时消除

• 准备合适的板盖或封板膜，减少蒸发和污染

二、开机与系统初始化

1. 开机

• 按下仪器前面板电源开关，光源开始预热（约 10–15 分钟）

• 软件端自动检测设备状态，显示连接成功信息

2. 波长与滤光片确认

• 通过软件或面板菜单查看当前滤光片位置

• 若需更换或增加波长，关闭电源后按说明书更换滤光片，并重新校验

3. 机械归位

• 开机后托盘自动归位至初始位置

• 检查托盘进出是否顺畅，无卡顿

三、测量模式设置

Multiskan EX 常用三种检测模式：终点法、动力学法、多波长法。

1. 终点法（End-point）

• 适用：ELISA、终止式酶反应

• 设置：

• 主波长（如 450 nm）

• 辅波长（如 620 nm，用于背景扣除）

• 板型布局（标准、空白、样品孔标记）

• 读数次数：一般为 1 次

2. 动力学法（Kinetic）

• 适用：实时记录酶反应过程、细胞增殖实验

• 设置：

• 测量波长

• 读数间隔（如 30 秒）

• 总记录时间（如 10 分钟）

• 摇匀时间与幅度

3. 多波长法（Multi-wavelength）

• 适用：双波长背景扣除、多指标检测

• 设置：

• 按顺序选择多组波长

• 软件将自动计算修正值

四、板型与方法设置

1. 板型布局

• 使用软件的板图编辑器标记各孔用途：

• 标准品（Std）

• 空白孔（Blank）

• 样品孔（Sample）

• 质控孔（QC）

• 检查位置安排是否对称，避免梯度反向或漏设空白

2. 方法参数

• 读取方式（垂直光束直射）

• 摇匀参数：振幅与时间

• 数据处理方法：曲线拟合类型（线性、四参数、五参数等）

• 浓度计算公式及单位

3. 保存与调用

• 将设置保存为方法文件（Method File），以便重复实验调用

五、样品加载与测量

1. 上板

• 将微孔板放置在托盘中央定位槽内，保证孔底平整

• 确保板孔中液体体积一致（一般 100–200 μL）

• 如使用透明板盖，确认不影响光路

2. 开始测量

• 在软件端点击“开始”按钮，仪器托盘自动进入测量位置

• 光源照射选定孔位，检测器采集透射光信号

• 托盘按预设顺序逐孔扫描，记录 OD 值

3. 测量过程监控

• 实时观察软件显示的进度与数据

• 若出现异常读数（明显偏高或偏低），可暂停检查板孔状态

六、数据处理与结果输出

1. 空白校正

• 软件自动将空白孔 OD 值作为基线扣除背景

2. 标准曲线拟合

• 根据标准品浓度绘制曲线

• 可选择不同拟合方法（线性、四参数、五参数、对数回归等）

• 检查 R² 值是否满足实验要求（一般 ≥0.99）

3. 样品浓度计算

• 软件根据曲线方程自动换算样品浓度

• 对超出线性范围的结果进行稀释重测

4. 报告生成

• 输出表格（OD 值、浓度值、统计参数）

• 生成图形（标准曲线图、柱状图）

• 保存为 Excel、PDF 或 LIMS 格式

七、测量结束与关机维护

1. 取出板

• 测量完成后托盘自动推出

• 小心取出微孔板，避免溢液污染仪器

2. 清洁

• 用无绒布或棉签清理托盘表面

• 若有试剂溅入仪器内部，应立即断电并按维修流程处理

3. 软件与电源

• 保存实验数据与方法文件

• 关闭软件，退出操作系统

• 关闭仪器电源，待光源冷却后断开电源线（如长时间不使用）

4. 定期维护

• 每周检查滤光片和光源

• 每月进行波长准确性与吸光度线性校准

• 每半年清洁内部光路（需专业人员）

八、常见问题处理

1. OD 值异常偏高或偏低

• 检查滤光片波长设置是否正确

• 确认板孔无气泡、液面一致

• 检查光源亮度及预热状态

2. 读数重复性差

• 检查托盘定位与导轨清洁

• 确保样品加液均匀且混匀充分

3. 通讯失败

• 检查通讯线与端口号设置

• 重新启动软件与仪器

4. 曲线拟合不佳

• 检查标准品配制浓度与标记位置

• 确认反应是否充分终止

九、二手 Multiskan EX 操作注意事项

• 使用前先进行全套性能测试（波长准确性、吸光度线性、重复性）

• 根据检测需求确认滤光片配置是否齐全

• 检查光源寿命，必要时更换

• 确保托盘机械运行平稳，无异响

• 软件版本与操作系统兼容性要提前验证

十、结语

Multiskan EX 酶标仪的标准化操作流程不仅关系到单次实验的成败，也直接影响数据的长期可比性与实验室的质量管理水平。通过严格遵守操作步骤，从开机预热、方法设置、数据采集到关机清洁，每个环节都能最大限度地减少误差和损耗，确保该设备在科研、临床、食品、环境等不同检测任务中发挥稳定可靠的性能。