赛默飞酶标仪Multiskan Ascent使用流程

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Thermo Scientific Multiskan Ascent 酶标仪使用流程详解

一、前言

Multiskan Ascent 是 Thermo Scientific 公司出品的经典滤光片式酶标仪，广泛应用于ELISA、蛋白定量、细胞毒性、酶活性检测等生物实验中。其操作简便、性能稳定、兼容性强，能够满足科研、临床、药检、食品安全等多个领域的检测需求。

为了确保仪器高效运行、提升实验数据的准确性与可重复性，使用者需严格遵循标准化的操作流程。本文件将系统梳理 Multiskan Ascent 酶标仪从启动、实验设定到数据处理的全过程，帮助实验人员规范使用，避免误差和故障发生。

二、设备组成与功能模块概览

2.1 设备主要构成

主机主体：含光源、检测舱、滤光片轮、电路控制系统；
微孔板托盘：自动进出板位平台；
滤光片系统：最多可安装8片滤光片，支持340–750 nm范围；
通讯接口：串口/USB用于与上位机连接；
控制软件：配套 Ascent 软件系统，用于设置参数与数据处理。

2.2 软件主要功能模块

Protocol Setup（实验参数设置）
Plate Layout（孔位定义与样本分组）
Measurement（数据采集与仪器控制）
Data Analysis（计算平均值、标准差、浓度等）
Export & Report（导出数据与生成报告）

三、使用前准备

3.1 仪器检查

确认电源线连接正常，接地良好；
打开主机开关，检查通电状态与指示灯；
查看滤光片轮是否安装正确（450 nm、620 nm等常用波长）；
启动电脑并打开 Ascent 软件，确认与仪器通信正常；
检查上次读板后是否清理干净，光学窗口无灰尘或液体残留。

3.2 软件环境准备

软件安装完整、驱动无异常；
时间设置正确，避免数据时间错乱；
使用者有操作权限，并知晓实验编号、试剂批次等背景信息。

四、实验设置流程

4.1 创建新实验协议

打开 Ascent 软件；
选择 “New Measurement Protocol”；
命名实验（如：ELISA_CRP_20250808）；
设定板型（标准96孔）；
进入参数设定页面。

4.2 设置检测波长

点击 “Add Wavelength” 添加主波长（如450 nm）；
如需要，勾选参考波长（如620 nm）以做背景扣除；
可设定多个波长同时读取，实现多通道分析。

4.3 选择检测模式

模式名称	功能说明
End-point	终点法，适用于 ELISA 类实验
Kinetic	动力学法，实时跟踪酶促反应
Multi-read	多次重复读数以减少误差

常规 ELISA 使用 End-point 模式，需设置延迟时间（如10秒）与摇板时间（如5秒）。

4.4 定义孔位布局

打开 “Plate Layout”；
标注空白孔（Blank）、阴性对照、阳性对照、标准品、样本孔；
可设置分组、重复孔；
输入样本编号、组别名称等注释信息。

五、实验操作与加样

5.1 准备试剂与样本

配制反应液、底物液、终止液等；
标准品稀释梯度需在实验当天现配；
样本按要求稀释处理，确保批间一致性。

5.2 加样至微孔板

按板图布局顺序准确加样；
每孔加样体积应一致（如100 μL）；
避免气泡，必要时轻拍板底去除；
加完后立即进行孵育（如需要37°C恒温反应）。

六、微孔板读取流程

6.1 插入微孔板

样本孵育完成并加入终止液后进行读板；
打开仪器托盘，将微孔板置入板位；
孔A1朝左上角，盖膜如有需移除；
关闭托盘，准备读取。

6.2 启动读板操作

在软件中点击 “Start Reading”；
系统自动控制滤光片旋转与孔位扫描；
检测时间依读板模式不同为10秒至数分钟不等；
可实时查看各孔的OD值读取进度。

七、数据处理与导出

7.1 查看原始数据

仪器读取完毕后，软件自动生成数据表；
每孔 OD 值一目了然，可筛选查看异常值；
若设置了参考波长，系统会自动执行背景校正。

7.2 自动分析功能

平均值、标准差、CV 值计算；
标准曲线自动拟合（线性、Log、4PL等）；
样本浓度回归计算（需录入标准品浓度）；
可标记高OD值、低OD值或无效孔。

7.3 导出结果文件

支持导出为 Excel、CSV、PDF、TXT 等格式；
可打印完整报告，包括板图、标准曲线与样本数据；
文件命名建议规范：实验名称+日期+操作者（如：MTT_CellA_20250808_XL.xls）；
建议备份保存至本地服务器与外部硬盘双通道存储。

八、使用后清洁与关机

8.1 清洁仪器

用无尘布擦拭微孔板托盘与光窗区域；
若发现液体溅出，应立即清洁，避免腐蚀；
不使用水流或喷雾，避免电路短路。

8.2 正确关机

保存数据后关闭软件；
关闭仪器电源开关；
若当日不再使用，可关闭电脑与断开主电源。

九、使用注意事项

9.1 操作规范

操作人员必须经过培训，熟悉波长设置与数据导出流程；
实验过程中应避免频繁更改参数或中断操作；
加样需准确，严防交叉污染与加错孔位。

9.2 常见错误及处理

问题	原因分析	建议处理
OD值异常偏低	波长设置错误、底物失效	检查滤光片与试剂有效期
读数不均	板底有气泡或污染	重加样并轻拍去泡
软件无法连接仪器	USB线松动、驱动丢失	检查端口，重装驱动程序
读板速度慢	滤光片轮阻力大	清洁滤光片轮，检查电机运转
某列无读数	微孔板未放平或未盖紧	重新放置板位，检查接口