1. 检测波长的基本原理

Multiskan GO酶标仪的检测原理基于比色法（吸光度法）和相关光学检测技术。光源发出的特定波长的光通过微孔板中的样品时，样品中的化学物质或生物分子会对光进行选择性吸收或散射。探测器记录通过样品后的光强变化，根据比尔-朗伯定律（Beer-Lambert Law）计算出样品的吸光度，从而实现定性或定量分析。

比尔-朗伯定律公式：

$$A=\epsilon \times c\times l$$

• $A$：吸光度

• $\epsilon$：摩尔吸光系数

• $c$：样品浓度

• $l$：光程长度

不同的化合物在不同波长下的吸收峰不同，因此波长选择直接影响检测灵敏度与特异性。例如，核酸在260 nm处有最大吸收峰，蛋白质在280 nm处有强吸收峰，而许多酶促反应产物在405 nm、450 nm、490 nm等可见光区域有明显的吸收特征。

2. Multiskan GO的波长范围与配置

2.1 波长范围

Multiskan GO酶标仪具有极宽的波长检测范围，覆盖紫外至可见光区域：

• 范围：200 nm – 1000 nm

• 分辨率：通常为1 nm（高精度波长选择）

• 波长选择方式：无需手动更换滤光片，采用单色仪（Monochromator）系统，可实现任意波长的快速切换。

2.2 单波长与双波长模式

• 单波长模式：在一个波长下检测样品，适用于大多数常规吸光度测量。

• 双波长模式：在两个波长下测量（一个测量波长和一个参考波长），通过计算差值消除背景噪音或样品本身的光散射影响。例如，在酶促反应检测中，主波长选择产物吸收峰，参考波长选择产物无吸收的区域，以提高信噪比。

2.3 光学系统特点

Multiskan GO采用全息光栅单色仪技术，相比传统滤光片系统具有以下优点：

• 波长可连续可调，无需购买和更换多个滤光片。

• 光谱带宽窄，波长选择精度高。

• 切换速度快，适合多波长扫描实验。

3. 波长选择的典型应用

Multiskan GO的多波长检测能力使其在不同类型的实验中都能发挥优势。

3.1 核酸定量检测

• 常用波长：260 nm（核酸最大吸收峰），280 nm（蛋白质吸收峰）。

• 应用说明：260/280比值用于评估核酸纯度。纯DNA的260/280比值约为1.8，纯RNA的比值约为2.0。

3.2 蛋白质定量检测

• 常用波长：280 nm（芳香族氨基酸吸收峰）。

• 其他方法：BCA法（562 nm）、Bradford法（595 nm）、Lowry法（750 nm）。

3.3 酶活性检测

• 碱性磷酸酶：405 nm

• 乳酸脱氢酶：340 nm

• 过氧化物酶：450 nm

• 说明：选择酶促反应产物的最大吸收峰波长可获得最佳灵敏度。

3.4 ELISA（酶联免疫吸附试验）

• 常用波长：450 nm（显色产物吸收峰），参考波长通常选在540 nm或570 nm以消除背景干扰。

3.5 细胞活力检测

• MTT法：570 nm

• WST-1法：450 nm

• XTT法：450 nm

• 这些方法通过测量代谢产物的吸收峰来反映细胞代谢活性。

3.6 光谱扫描

• 功能：从200 nm到1000 nm连续扫描，绘制吸收光谱曲线，用于未知样品的吸收特性分析。

4. 波长切换与扫描机制

Multiskan GO的波长切换依赖于高精度单色仪，通过全息光栅将光分解成不同波长，并选择所需波长照射样品。其特点包括：

• 切换速度：几乎瞬时切换，适合快速多波长检测。

• 重复性高：波长切换的准确性通常在±1 nm以内。

• 扫描模式：支持单点扫描、多点扫描和全板扫描，可在不同波长下生成完整的光谱数据。

5. 波长校准与维护

波长校准对于保证数据准确性至关重要。虽然Multiskan GO出厂前已完成精密校准，但长期使用后仍需定期检查。

5.1 校准方法

• 使用标准吸收液（如对硝基苯酚、重铬酸钾溶液）在已知波长处检测吸光度。

• 与理论值比较，如偏差超出允许范围，可联系厂家进行波长校准。

5.2 维护建议

• 保持光路清洁，避免灰尘和指纹污染光学窗口。

• 避免在高湿、高温环境下存放，防止光学元件受潮。

• 不自行拆卸光学系统，防止损坏光栅和透镜。

6. 使用波长选择时的注意事项

1. 避免饱和：样品吸光度过高（>3.0 AU）会导致探测器饱和，应适当稀释样品。

2. 参考波长选择：参考波长应选择样品无明显吸收的区域。

3. 样品匹配：所有检测孔应使用相同批次、相同条件下制备的样品，减少波长选择误差。

4. 避免气泡：气泡会引起散射光，影响吸光度读数。

5. 光谱重叠：多组分样品可能存在吸收峰重叠，应结合扫描功能选择最佳检测波长。

7. 多波长检测的优势

与传统单波长酶标仪相比，Multiskan GO的多波长检测带来显著优势：

• 灵活性高：无需物理更换滤光片即可检测任意波长。

• 适用范围广：可满足紫外和可见光全谱段的检测需求。

• 数据可靠性高：双波长测量消除背景干扰，提高数据稳定性。

• 实验效率高：快速切换波长支持多种检测在同一平台完成。

8. 总结

Multiskan GO酶标仪凭借200–1000 nm的宽波长范围、高精度单色仪系统和灵活的多波长检测能力，为科研和检测提供了极大的便利。在核酸、蛋白质、酶活性、ELISA以及细胞活力等多种实验中，合理选择波长不仅能显著提升检测灵敏度，还能减少干扰，提高数据的准确性和可重复性。配合适当的校准与维护，Multiskan GO的波长检测系统能够长期保持稳定的性能，为实验室提供可靠的数据支持。