赛默飞酶标仪 Multiskan EX 测试步骤

一、前言

赛默飞酶标仪 Multiskan EX 是一款高精度的微孔板吸光度检测设备，广泛应用于 ELISA、酶活测定、蛋白定量及多种比色分析实验。其测试步骤不仅影响实验效率，更直接决定数据的准确性与重复性。为了确保实验顺利进行，必须在测试前做好充分准备，并在测试过程中严格遵循规范操作。

二、测试前的准备工作

1. 环境准备

• 温度：保持室温在 18–25 ℃，避免阳光直射或强气流干扰。

• 湿度：建议在 40–60% 范围内，防止静电或试剂挥发过快。

• 台面：保持水平稳固，防止仪器运行时震动。

2. 仪器检查

• 确认电源线与信号线连接牢固。

• 检查光源状态，如灯泡是否正常工作、是否需要更换。

• 检查微孔板托架运行是否顺畅，无卡滞现象。

3. 试剂与耗材准备

• 根据实验方案配制试剂，确保浓度和配比准确。

• 微孔板应洁净无划痕，孔内无灰尘或水渍。

• 准备移液器及相应规格枪头，确保刻度准确。

4. 软件与参数准备

• 打开 Multiskan EX 配套软件，确认已连接仪器。

• 新建实验模板，输入检测波长、读数模式、数据保存路径等信息。

三、样品与试剂处理

1. 加样

• 严格按照实验方案的顺序加样，避免交叉污染。

• 对 ELISA 等反应类实验，加样速度应一致，保证反应时间可比。

• 检查加样后液面高度，确保各孔体积一致。

2. 洗板（如适用）

• 按照实验要求用洗板机或手工洗板，去除未结合物质。

• 洗板后轻拍吸水纸，避免残液影响读数。

3. 显色反应

• 按顺序加入显色剂，保持时间一致。

• 反应完成后及时终止，防止颜色继续加深影响读数。

四、仪器设置步骤

1. 启动与预热

• 打开电源，待光源预热 10–15 分钟以确保光强稳定。

• 软件连接成功后进入测试界面。

2. 检测模式选择

• 终点法：适合单时间点测定，如 ELISA 终点读数。

• 动力学法：适合反应速率分析，如酶活性测定。

• 多波长检测：用于需要同时测量主波长与参考波长的实验。

3. 波长设置

• 根据实验方案选择主波长（如 ELISA 常用 450 nm）。

• 设置参考波长（如 620 nm）以扣除背景。

4. 微孔板布局

• 在软件中定义标准品、空白孔、样品孔位置。

• 检查布局是否与实际微孔板一致。

五、执行测试

1. 放置微孔板

• 将板放入托架，确保方向与软件布局一致。

• 注意避免手指触碰孔底，防止影响透光率。

2. 启动读取

• 点击“开始测试”，仪器按设定顺序逐孔读取吸光度。

• 动力学模式下，仪器会按预设间隔连续采集数据。

3. 监控运行状态

• 观察屏幕进度条，确保仪器运行正常。

• 若出现异常提示，应暂停测试并检查原因。

六、数据获取与处理

1. 数据导出

• 测试完成后，将数据导出为 Excel、CSV 或 TXT 格式。

• 保存文件命名应包含日期、实验编号等信息，方便追溯。

2. 初步处理

• 检查空白孔、标准品孔的读数是否合理。

• 对重复孔计算平均值，剔除明显异常值。

3. 计算结果

• 扣除背景值后，利用标准曲线计算样品浓度。

• 根据实验要求进行统计分析和结果解释。

七、结果验证

1. 内部对照检查

• 检查阳性对照与阴性对照是否在预期范围内。

• 标准曲线的相关系数应≥0.99。

2. 重复性评估

• 计算重复孔的变异系数（CV%），一般要求 <10%。

• 若重复性差，需排查加样、试剂、仪器等环节。

八、测试后处理

1. 微孔板处理

• 一次性微孔板用后应按生物废弃物处理。

• 可重复使用的板需按照清洗流程处理并烘干保存。

2. 仪器清洁

• 使用无尘布擦拭托架和外壳，保持清洁。

• 检查光路是否有液滴或污渍，必要时清洁。

3. 数据归档

• 将原始数据、处理文件、实验记录一并存档。

• 归档应符合实验室质量管理体系要求。

九、常见问题与解决

1. 数据异常波动

• 可能原因：光源不稳定、样品中有气泡、加样不均。

• 解决方法：预热光源、去除气泡、规范加样。

2. 吸光度过高

• 可能原因：样品浓度过高、显色时间过长。

• 解决方法：稀释样品、缩短显色时间。

3. 吸光度过低

• 可能原因：试剂失效、反应不充分。

• 解决方法：更换试剂、延长反应时间。

十、优化建议

1. 建立标准化测试模板

• 在软件中预设常用的检测模式和波长组合，减少重复设置时间。

2. 定期维护

• 每月进行一次光源和滤光片检查，确保性能稳定。

3. 操作培训

• 定期对实验人员进行测试步骤培训，确保操作一致性。

4. 引入质控样

• 在每次实验中加入固定浓度的质控样，监测系统稳定性。

十一、总结

赛默飞酶标仪 Multiskan EX 的测试步骤涵盖 环境与仪器准备、样品处理、参数设置、数据采集、结果验证及后处理 六大环节。每一步都对最终结果有直接影响，尤其是波长设置、加样一致性和数据处理的规范化。通过遵循标准化操作流程并结合质量控制，可以显著提升实验数据的可靠性与可重复性，使 Multiskan EX 在科研、临床及检测领域发挥最大效能。