赛默飞酶标仪Multiskan EX读数方法

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赛默飞酶标仪 Multiskan EX 读数方法详解

一、引言

Thermo Scientific Multiskan EX 酶标仪是一款基于光度法原理的微孔板检测设备，广泛用于ELISA、酶活测定、细胞增殖、细胞毒性分析、蛋白定量等生命科学实验中。读数作为其核心功能环节，是获取实验数据最关键的步骤之一。正确掌握 Multiskan EX 的读数方法，是确保数据准确性与实验可重复性的基础。

二、基本工作原理

Multiskan EX 使用可见光波段中的单色光穿透微孔板中反应液，通过测量透过光的强度，转换为光密度（OD, Optical Density）值。该值反映了样本中底物或产物的浓度，通常以Abs表示。

核心检测流程如下：

光源（卤素灯）发出宽谱光。
滤光片转盘选定所需波长。
单色光穿透每一孔反应液。
探测器接收透射光强度。
系统计算并输出光密度值。

通过波长设定与时间控制，可实现终点法、动力学法、双波长法等多种检测方式。

三、读数模式分类

Multiskan EX 支持多种读板模式，根据实验类型可灵活选择：

3.1 End-point 终点法

最常见的检测模式。
适用于ELISA类实验，底物与酶反应结束后一次性读取OD值。
通常设定主波长和参考波长各一次，读数完成后可保存或导出。

3.2 Kinetic 动力学法

连续多次读取每个孔的OD值，用于分析反应过程随时间的变化。
常用于酶活性测定、Michaelis-Menten动力学曲线等。
可设定读取间隔、读取次数与总时间。

3.3 Multi-wavelength 多波长检测

单个样品同时使用多个波长读取OD，常用于比值计算或多组分定量。
可用于校正背景干扰（通过参考波长扣除）或分辨多种染料。

3.4 Spectral Scanning 波谱扫描（部分型号扩展）

扫描某孔在多个连续波长的吸收光谱，用于筛选最佳波长。
适合开发新试剂或评估反应特性。

四、读数前准备工作

4.1 仪器检查

确保设备电源接通并成功自检。
检查滤光片转盘状态与所需波长是否安装完整。
确保光源正常（若光源老化，OD值波动明显）。

4.2 微孔板准备

使用标准96孔或384孔平底透明微孔板。
板底应清洁、无刮痕、无指纹或气泡。
加样量应均匀一致，避免边缘效应或液面偏斜。

4.3 软件连接

启动 Ascent 软件或兼容控制平台。
新建实验方案或调用预设模板。
确保波长、读数参数、板型等信息正确无误。

五、详细读数操作流程

5.1 启动软件并创建实验

选择“New Measurement Protocol”。
输入实验名称、板型（96-well/384-well）及项目备注。
点击“Next”进入波长和读数参数设置界面。

5.2 设置波长

点击“Add Wavelength”选择主波长（如450 nm）。
若需参考波长，勾选“Reference”选项并设置参考值（如620 nm）。
系统显示当前设备支持的滤光片波段，确保波长可用。

5.3 设定读取方式

选择终点法（End-point）或动力学法（Kinetic）。
End-point：设定读数延迟时间（Delay）、摇匀时间（Shake）。
Kinetic：设定读取周期、间隔时间与总时长。

5.4 读板顺序与孔布局

设定读取顺序（如从A1按行或按列）。
可在“Plate Layout”中自定义阳性对照、阴性对照、空白孔及样品孔位置。
系统会根据布局自动关联结果。

5.5 插入微孔板并开始读数

打开读板舱门，插入已加样的微孔板。
关闭舱门，点击“Start Reading”开始测定。
系统自动完成光源点亮、波长切换、孔位定位与OD值采集。

六、数据查看与导出

6.1 实时查看

读数过程中可在屏幕查看各孔OD实时曲线（动力学模式）或单点数据（终点模式）。
颜色标记高低浓度区域，方便初步判断结果趋势。

6.2 数据输出格式

可导出为CSV、Excel、TXT等格式，便于后续分析。
支持自动计算平均值、标准差、背景扣除、比值计算等功能。

6.3 报告生成

软件可按孔位自动生成检测报告，包含：

实验参数信息；
OD原始数据；
统计数据；
布局图与异常孔标识。

七、常见应用场景的读数设置举例

实验类型	主波长	参考波长	读取模式	时间设置（如适用）
ELISA（TMB）	450 nm	620 nm	End-point	延迟10秒，摇匀5秒
酶活测定	405 nm	无	Kinetic	每30秒一次，共10分钟
MTT检测	570 nm	620 nm	End-point	延迟30秒
BCA蛋白测定	562 nm	无	End-point	摇匀10秒

八、使用过程注意事项

校准光路系统：建议每月使用标准孔板检测透光率，确保数据稳定。
避免气泡干扰：加样后注意检查孔中是否有气泡，可轻拍板底消除。
控制温度影响：保持室温稳定，尤其对动力学反应影响显著。
重复性控制：每孔加样量、试剂量应一致，避免液面高度不同造成误差。
仪器预热：建议开机后预热10~15分钟后再开始读数，确保光源稳定。
板底污染：若有残液、油污或指纹，会严重影响读数结果，必须擦净。

九、常见问题与解决方案

问题现象	可能原因	解决方案
OD值偏低	波长错误、底物降解	核对滤光片与底物说明，更换底物
OD值不稳定	光源老化、滤光片松动	更换灯泡、检查滤光轮
某些孔无读数	孔底有气泡或液体不均匀	检查加样与消泡情况
数据漂移	温控波动、读数时间过长	控制环境温度、缩短读取时长
软件无法读板	接口断开或设置冲突	重启软件、检查USB或串口