赛默飞酶标仪 Multiskan Ascent 波长调节说明书

一、设备简介

Multiskan Ascent 是 Thermo Scientific（原 Thermo Labsystems）推出的一款高性能微孔板酶标仪，广泛应用于ELISA、蛋白定量、核酸检测、细胞分析及药物筛选等项目中。设备采用分光光度法原理，依赖特定波长下的吸光度差异来实现定量分析。

Multiskan Ascent 最大的特点之一，是支持多波长检测和可更换滤光片设计，用户可通过波长调节功能灵活应对不同实验需求，如吸收峰扫描、主/参考波长切换、多组分比色检测等。

二、波长调节的原理与作用

1. 光学检测原理

Multiskan Ascent 通过内置的光源（卤素灯）发出宽谱光，光束经选定的干涉滤光片过滤后照射到样品孔中，透过样品后被光电探测器接收，转化为电信号，最终通过软件转换为吸光度值（OD值）。

2. 波长调节的意义

• 匹配显色反应的最大吸收峰：如TMB底物反应需使用450nm波长检测；

• 消除背景干扰：使用参考波长（如630nm）进行差值校正；

• 实现多组分分光检测：不同波长对应不同组分的最大吸收位置；

• 进行谱图扫描与反应特性研究：探索未知样品的吸收特征。

3. 滤光片系统结构

• Multiskan Ascent 可容纳最多8个滤光片；

• 滤光片为12.5mm标准干涉滤光片；

• 滤光片安装在光路转盘或直线滑槽中，软件通过电控切换所需波长；

• 滤光片可由用户根据实验需求手动更换与设定。

三、可选波长与滤光片配置

1. 常用波长选项

2. 滤光片购买与更换说明

• 可通过 Thermo 官方或授权渠道购买；

• 滤光片需标明中心波长与带宽（如 450±5nm）；

• 更换滤光片前需关闭设备电源，避免强光照射；

• 更换后须在软件中重新定义波长与对应槽位。

四、波长设置操作流程（以 Ascent 软件为例）

步骤一：打开设备与软件

1. 启动 Multiskan Ascent 主机；

2. 连接并打开 Ascent 软件，系统自动识别设备；

3. 进入主界面后点击 "New Measurement Protocol"（新建检测程序）。

步骤二：设置波长参数

在 Protocol 编辑页面：

1. 点击 “Wavelength” 栏目；

2. 选择主波长（Primary wavelength），如 450nm；

3. 若启用双波长检测，点击“Secondary wavelength”选择参考波长（如 630nm）；

4. 软件自动对应滤光片槽位（如 Slot 1 = 450nm）；

5. 如需修改槽位对应关系，进入“Filter Configuration”界面重新分配。

步骤三：滤光片配置设置

1. 在菜单栏选择 “Instrument” → “Filter Configuration”；

2. 在弹出窗口中，手动输入每个槽位的滤光片中心波长；

3. 确认无误后点击“Apply”保存设置；

4. 返回主界面，波长选择列表将自动更新为当前滤光片配置。

步骤四：保存检测模板

• 输入方法名称；

• 保存为默认方法模板（.asp文件）；

• 方便后续直接调用，无需重复设置。

五、波长设置实例说明

1. ELISA 单波长检测设置

• 主波长：450nm

• 参考波长：关闭

• 读取模式：End-point

• 空白扣除：启用A1孔

2. 双波长检测模式

• 主波长：450nm

• 参考波长：630nm

• 软件输出：OD450-OD630（自动差值）

• 适用于去除板材与试剂本身的吸收干扰

3. 多波长扫描模式

• 设定多个波长（如 405、450、492、630nm）；

• 适用于吸收光谱分析或未知样品特征研究；

• 输出为每孔多波长OD值列表，便于数据建模。

六、波长调节常见问题及排查方法

七、波长调节注意事项与最佳实践

1. 正确选择波长

• 必须根据试剂盒说明或底物最大吸收波长选择滤光片；

• 同一种试剂不同品牌可能推荐波长不同，使用前核实；

2. 滤光片维护建议

• 定期（每月）使用无尘布擦拭滤光片表面；

• 禁止用手直接接触滤光片中心区域；

• 滤光片若出现划痕、脱膜、透光下降，应立即更换；

3. 标定与校准建议

• 每半年使用标准吸光度液体进行波长与OD线性校准；

• 记录每次滤光片更换的波长配置，避免操作失误；

• 维护台账中记录波长设定历史与检测项目用途。

八、波长调节应用案例

案例一：双波长差值法提升ELISA精度

• 背景：某实验室检测人血清中IL-6水平，采用TMB显色法，出现重复性偏差；

• 处理：启用双波长检测，设主波长450nm、参考波长630nm，结果变异系数CV下降30%；

• 说明：使用参考波长能有效抵消板材与环境光干扰，提高检测稳定性。

案例二：多波长扫描探索未知样品吸收峰

• 背景：研究某中药提取液的主吸收峰；

• 操作：设定波长范围405–630nm，步长每20nm扫描；

• 输出：样品在492nm处吸光度最大，后续实验统一使用492nm检测。

九、软件支持与版本建议

• 建议使用 Ascent Software V2.6 及以上版本；

• 部分老版系统不支持自定义滤光片命名；

• 软件应定期更新，确保兼容新型号滤光片或固件；

• 设置完成后建议导出模板文件备份（.asp格式）。

十、总结

Multiskan Ascent 酶标仪提供灵活的波长调节能力，是其适配多类型比色检测的核心优势。通过合理选择滤光片、规范配置软件参数、准确设置主参考波长及检测模式，可显著提升实验结果的准确性与重复性。建议实验室制定标准化波长设定SOP、定期校准与维护滤光片系统，保障设备稳定运行与数据可信性。