一、读数模式的分类与概述

Varioskan Flash 支持多种读数模式，主要包括：

1. 端点法（Endpoint Reading）

2. 动力学测定（Kinetic Reading）

3. 光谱扫描（Spectral Scanning）

4. 多波长检测（Multi-Wavelength Reading）

5. 区域扫描（Well Area Scanning）

6. 全板成像式扫描（部分型号支持）

每种模式都可以结合吸光度、荧光、发光等检测类型使用，不同的实验需求可选择相应模式。

二、端点法（Endpoint Reading）

1. 原理

端点法是在特定波长下，对微孔板中每个样品孔进行一次或几次单独的读数，记录测量结束时的信号值。这种方法假设反应在读数时已经结束或稳定，不需要监控反应过程。

2. 特点

• 测量速度快，适合高通量检测

• 操作简单，数据量小，易于分析

• 对反应的时间变化信息无法提供

3. 应用

• ELISA 检测（终点法比色）

• 核酸/蛋白质定量（OD260/OD280）

• 荧光标记物定量

• 化学发光终点检测

4. 操作要点

• 确保反应在读数前完全结束并稳定

• 设置合适的主波长与参考波长

• 检测前混匀样品以确保均一性

三、动力学测定（Kinetic Reading）

1. 原理

动力学模式是在固定时间间隔内，连续对每个样品孔进行多次测量，以记录反应过程中的信号变化曲线。可用于计算反应速率、反应动力学参数等。

2. 特点

• 能反映反应过程的实时变化

• 数据量大，适合动力学分析

• 对仪器速度与稳定性要求高

3. 应用

• 酶动力学（Km、Vmax 测定）

• 细胞生长曲线绘制（OD600 动态监测）

• 实时荧光反应跟踪

• ATP 消耗速率分析

4. 操作要点

• 设置合适的采集间隔（太长会丢失细节，太短会增加数据量与检测时间）

• 控制实验温度，保证反应条件稳定

• 对快速反应可选择加样后立即启动测定

四、光谱扫描（Spectral Scanning）

1. 原理

光谱扫描是在一定波长范围内，按指定步进（如 1 nm）对样品进行连续测量，绘制光谱曲线。可用于寻找吸收峰或荧光激发/发射峰。

2. 特点

• 提供全波段信息，便于未知样品分析

• 可精准选择最优检测波长

• 测量时间长于单波长检测

3. 应用

• 确定 ELISA 或比色法的最佳检测波长

• 核酸/蛋白质紫外吸收曲线绘制

• 荧光染料的激发/发射光谱分析

• 研究化合物的光学特性

4. 操作要点

• 设置合适的波长范围（200–1000 nm）和步进间隔

• 样品体积充足且浓度适中，避免信号饱和

• 扫描速度与分辨率平衡，防止测量时间过长

五、多波长检测（Multi-Wavelength Reading）

1. 原理

多波长检测是在一次读数中，同时测定两个或多个波长下的信号。常用于扣除背景干扰或获取多参数信息。

2. 特点

• 快速获取多波长数据

• 可用于双波长扣背景、比值计算

• 有助于提高检测精度

3. 应用

• 双波长 ELISA（如主波长 450 nm，参考波长 620 nm）

• 荧光比值分析（如 Fura-2 钙离子检测 340/380 nm）

• 浊度扣除、气泡干扰校正

4. 操作要点

• 合理选择主波长与参考波长，避免信号重叠

• 参考波长应与主波长接近但不被样品强吸收

• 对于比值分析，确保光源和探测器切换速度快且稳定

六、区域扫描（Well Area Scanning）

1. 原理

区域扫描是在单个孔内分多个位置进行读数，然后取平均或分析分布情况。这种模式可减少孔内不均匀分布对结果的影响。

2. 特点

• 减少细胞培养或沉淀物不均匀造成的偏差

• 提供孔内分布信息（中心与边缘差异）

• 测量时间较长

3. 应用

• 细胞增殖实验（如 MTT、CCK-8）中细胞贴壁不均匀的情况

• 沉淀物或颗粒分布不均的样品

• 微阵列扫描（部分扩展功能）

4. 操作要点

• 设置扫描点数（如 4 点、9 点或更多）与扫描模式（环形、线性等）

• 样品量需足够覆盖整个扫描区域

• 对不均匀性较高的样品，可结合摇匀功能

七、模式选择策略

在实际应用中，模式选择取决于实验目标：

• 仅需终点数值 → 端点法

• 需要反应过程信息 → 动力学测定

• 未知样品或需优化波长 → 光谱扫描

• 扣除背景或比值检测 → 多波长检测

• 样品分布不均匀 → 区域扫描

八、数据处理与分析

1. 空白校正
   所有模式均建议使用空白对照孔，扣除系统背景。

2. 标准曲线拟合
   ELISA、定量检测需用标准品建立浓度-信号曲线，常用线性或四参数逻辑（4PL）拟合。

3. 动力学参数计算
   对动力学数据进行斜率计算或非线性拟合，得到反应速率常数等参数。

4. 光谱分析
   利用扫描数据分析峰位、半峰宽、吸收系数等光学特性。

九、影响读数模式表现的因素

1. 光源与探测器性能
   光强稳定性、探测器灵敏度直接影响多波长与扫描模式的精度。

2. 样品质量
   气泡、颗粒、沉淀会影响光路，尤其在区域扫描与动力学模式下影响显著。

3. 温控条件
   对酶动力学、细胞实验等温度敏感型检测，稳定的温控是保证结果可重复的前提。

4. 软件设置
   步进间隔、积分时间、扫描点数等参数需平衡精度与速度。

十、总结

赛默飞酶标仪 Varioskan Flash 通过丰富的读数模式，能够在不同实验类型和精度需求之间灵活切换。

• 端点法适合快速终点检测；

• 动力学模式适合反应过程监控；

• 光谱扫描适合波长优化与未知样品分析；

• 多波长检测提高准确性并支持比值计算；

• 区域扫描减少样品分布不均影响。

理解各模式的原理与适用场景，并结合实验目标合理选择，可显著提升实验效率和数据质量。