赛默飞 Varioskan LUX 实验设置详解

一、概述

赛默飞 Varioskan LUX 是一款多功能的微孔板检测仪，广泛应用于生命科学研究、临床诊断、药物筛选、环境监测等多个领域。其多种检测模式（如吸光度、荧光、化学发光、荧光偏振等）为不同类型的实验提供了灵活的设置选项。为了确保实验结果的准确性和重复性，合理的实验设置是至关重要的。

实验设置不仅包括选择合适的检测模式、光源波长、温控设置等，还涉及到样品的加样、微孔板的选择、数据采集策略的优化等。良好的实验设置能够确保在高通量筛选、酶动力学研究或定量分析等多种实验中获得精确的数据。

二、实验设置的基本步骤

1. 选择实验模式

在 Varioskan LUX 上，首先需要根据实验要求选择合适的检测模式。不同的模式对于样品类型、实验目的以及所需灵敏度有不同的要求。

• 吸光度检测：适用于大多数定量实验，如细胞增殖、DNA/RNA 定量等。选择适当的波长是关键。通常建议根据样品的吸收特征选择波长，确保信号处于仪器的最佳响应范围。

• 荧光检测：适用于灵敏度要求较高的实验，如基因表达、分子探针标记等。荧光检测模式需要选择合适的激发波长与发射波长组合，并对荧光染料进行校准。

• 化学发光检测：用于高灵敏度的免疫检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。在化学发光模式下，光源的灵敏度与样品反应的时间窗口至关重要。

• 荧光偏振检测：用于分析分子间的相互作用、配体结合等研究。此模式要求设置合适的偏振角度和激发光源。

2. 设置光源波长

在选择实验模式之后，设置光源波长是最关键的一步。在吸光度和荧光检测中，选择合适的波长确保光源与样品的吸收或发射特性相匹配。

• 吸光度模式：Varioskan LUX 提供广泛的波长选择，从200 nm到1000 nm不等。在选择波长时，应根据样品的吸收光谱选择最合适的波长。

• 荧光模式：选择激发波长和发射波长是荧光检测的关键。通过使用已有的荧光标准品或参考文献中的数据来确定最佳的波长范围。

Varioskan LUX 提供自动波长扫描功能，用户可以通过扫描确定最佳波长组合，并进行校准。

3. 温控设置

温控在多种实验中都扮演着重要角色，尤其是在酶反应或分子生物学实验中。Varioskan LUX 配有内置的温控模块，温控范围通常为室温至45°C，精度高达±0.5°C。

• 设置温度：在需要温控的实验中，如酶动力学反应、细胞培养等，需要在设置中指定目标温度，并确保设备能够在该温度下稳定运行。

• 温度均匀性：实验前应确保仪器已达到设定温度，并让仪器稳定一段时间，以确保实验结果的一致性。

4. 设置测量模式与读数时间

对于不同类型的实验，测量模式和读数时间的设置也需要根据实验要求进行调整。实验的读取时间会影响数据的灵敏度和可靠性。

• 短时间测量：适用于反应较快的实验，如细胞增殖或某些快速化学反应。在这种情况下，仪器的响应时间需要非常快，以捕捉到反应的早期变化。

• 长时间测量：适用于酶动力学或稳定性较强的实验。长时间测量能够确保实验过程中的各个时间点数据都能被准确记录。

5. 样品加样与孔板选择

微孔板的选择对实验结果有很大影响。Varioskan LUX 支持多种类型的微孔板（如96孔板、384孔板等），不同孔板具有不同的适用范围。

• 选择合适的孔板：在进行高通量筛选时，选择适当的孔板（如低自发荧光、透光性高的孔板）非常重要。标准的 96 孔板适用于大多数实验，但对于需要更高灵敏度的实验，可以选择 384 孔或更高孔数的板子。

• 样品加样：加样时需保证加样体积的一致性，避免气泡形成以及加样量的误差，这对结果的准确性至关重要。

三、不同检测模式的具体实验设置

1. 吸光度检测模式

吸光度检测模式常用于化学分析、蛋白质定量和细胞增殖等实验。在该模式下，需要根据样品的光吸收峰值选择适当的波长。Varioskan LUX 提供多种波长组合选择，以适应不同实验需求。

• 光源选择：对于大多数吸光度检测实验，选择氙闪光灯作为光源，因为其具有广泛的光谱范围和高光强。

• 波长设置：通常通过扫描检测样品的吸光度特征，选择最佳吸收波长。例如，蛋白质测定时常选择 280 nm 波长，而对于 DNA 或 RNA 的定量，常用 260 nm 波长。

• 读数方式：可以选择单波长读数、多波长读数或带宽读取，具体取决于实验需求。

2. 荧光检测模式

荧光检测模式具有极高的灵敏度，适用于多种生物学检测。在此模式下，必须精确设置激发波长与发射波长，确保信号的准确采集。

• 波长设置：选择荧光染料的激发与发射波长。例如，常用的绿色荧光染料（如 FITC）激发波长通常在 490 nm 左右，发射波长为 525 nm。

• 增益设置：荧光信号的灵敏度可以通过增益调节来优化。对于强信号，适当减少增益；对于弱信号，可增加增益来提高信噪比。

3. 化学发光检测模式

在化学发光模式下，选择合适的发光试剂和检测条件非常重要。此模式常用于免疫分析和标记物定量。

• 试剂选择：选择适合的化学发光试剂是实现高灵敏度检测的关键。根据实验的灵敏度要求，选择不同类型的化学发光底物。

• 反应时间设置：化学发光反应通常非常迅速，因此需要精确控制反应时间，以确保信号在最佳时间窗口内被捕捉。

4. 荧光偏振检测模式

荧光偏振检测模式常用于分析分子间的相互作用，尤其是在药物筛选和生物标志物研究中。

• 设置偏振角度：选择合适的偏振角度对于提高数据质量至关重要。此模式下，通常需要在指定的角度下进行测量，以确保结果的准确性。

• 激发与发射波长设置：与荧光模式类似，设置合适的激发与发射波长，确保实验中信号的准确性。

四、实验设置优化建议

1. 优化样品量与孔板结构
   为确保实验的高效性和数据的精确性，建议根据实验需求合理选择微孔板和样品量。对于高灵敏度实验，可以使用小孔板（如384孔板）来减少样品消耗。

2. 提高重复性与一致性
   在实验设计时，应确保同一实验中各样品的加样一致，孔板布局对照一致，并进行多重复孔设置，提高实验的统计学意义。

3. 温控与数据采集的协调
   在需要温控的实验中，确保温度设定与实验反应的时间要求相匹配。长时间实验可选用自动数据采集和处理功能，减少人工操作误差。

五、总结

Varioskan LUX 是一款功能强大的微孔板检测仪，其实验设置的合理性直接影响实验结果的准确性和稳定性。通过选择适当的实验模式、波长、温控和样品设置，可以最大限度地优化实验效果，确保高质量的数据输出。在进行实验设置时，充分了解仪器的功能和限制，合理配置实验条件，有助于提高实验的灵敏度、重复性和准确性。