赛默飞酶标仪 Varioskan Flash 实验流程详解

一、概述

赛默飞酶标仪 Varioskan Flash 是一款多功能、多模式微孔板检测仪，集吸光度、荧光、发光等检测模式于一体，支持从紫外到近红外的全波长扫描。该设备的设计兼顾高通量、灵活性和数据精确度，适用于分子生物学、免疫学、药物筛选、细胞生物学等多个领域。
为了获得稳定、准确的数据，用户需要严格按照规范进行实验操作。从实验前准备到数据分析，每一步都对最终结果有直接影响。

二、实验前准备

1. 环境与电源

• 将仪器放置在稳固的实验台上，远离强振动源和热源。

• 确保供电电压与仪器额定参数一致，并接入有效接地。

• 实验室温湿度应控制在厂家建议范围内，防止光学与电子元件受潮。

2. 仪器检查

• 检查电源线、数据线连接是否牢固。

• 检查样品舱及光学窗口是否清洁，无灰尘、污渍或指纹。

• 确认所需检测模块和滤光片已正确安装。

3. 试剂与耗材

• 提前配制并校准实验所需的标准品和样品。

• 使用符合光学检测要求的微孔板、比色皿或试管，避免使用表面有划痕或变形的耗材。

• 准备足够的移液器吸头、试剂盒及清洗液。

4. 软件与方法文件

• 确保控制软件已正确安装且版本与仪器兼容。

• 预先在软件中建立或加载实验方法文件，包含波长、读数模式、扫描速度等参数。

三、仪器启动与初始化

1. 打开电源开关，等待系统自检完成。

2. 观察屏幕或软件界面，确认仪器状态正常，无报警提示。

3. 如果上一次实验后更换了检测模块，应在软件中进行模块识别与校准。

4. 在需要温控的实验中，提前设定温度，让仪器进入预热状态。

四、方法设定

1. 检测模式选择

Varioskan Flash 支持吸光度、荧光强度、荧光偏振、发光等多种模式，根据实验需求选择合适模式。

2. 波长设定

• 吸光度模式可直接输入单波长或双波长值；

• 荧光模式需设置激发与发射波长；

• 发光模式无需波长设定，但可调整积分时间。

3. 读数参数

• 选择终点法、动力学法或光谱扫描；

• 设定扫描速度与数据采集间隔；

• 对动力学实验，可设置总测量时间与采样频率。

4. 板型与孔布局

• 在软件中选择所用微孔板类型（96 孔、384 孔等）；

• 标记标准品、空白孔、对照组和样品孔的位置。

5. 数据处理设置

• 选择所需的计算方法（如标准曲线拟合、比值计算、背景扣除等）；

• 设置数据导出格式和保存路径。

五、样品加载

1. 加样规范

• 使用校准良好的移液器，确保加样体积一致；

• 避免气泡产生，气泡会影响光路并造成测量误差；

• 加样顺序应与软件设定的孔布局一致。

2. 孔板处理

• 加样完成后轻轻拍打或使用振荡器短暂混匀样品；

• 在进行动力学实验前，确保所有样品温度一致。

3. 比色皿或试管模式

• 若使用比色皿或试管检测，应将其放置在相应适配器内，确保光路对准。

六、检测过程

1. 将微孔板或比色皿放入样品舱，轻轻推入直至定位到位。

2. 在软件中确认板型和方法设定无误。

3. 启动测量程序，仪器将按照预设流程自动完成检测。

4. 动力学模式下，仪器会在设定的时间间隔内自动采集数据，用户可实时观察曲线变化。

5. 光谱扫描模式下，仪器会在设定的波长范围内逐步采集吸收或发射光谱。

七、数据处理

1. 实时结果查看

• 在检测过程中，软件会显示实时数据或曲线，方便用户判断实验进展。

2. 数据分析

• 对终点法实验，可直接查看计算后的结果表；

• 对动力学实验，可导出曲线数据并计算速率常数或其他参数；

• 对光谱扫描实验，可分析峰位、峰高及谱形特征。

3. 标准曲线

• 软件可自动拟合标准曲线，并计算未知样品的浓度值；

• 曲线拟合方法可选线性、二次、多项式或四参数、五参数逻辑回归等。

4. 数据导出

• 支持导出为 Excel、CSV、PDF 等格式；

• 数据可直接用于统计分析软件或绘图软件进行深度分析。

八、实验结束与清理

1. 检测完成后，将孔板或比色皿取出，避免残留样品污染仪器。

2. 如果使用了可能造成污染的生物样品，应及时清洁样品舱和适配器。

3. 关闭软件并安全断开与计算机的连接。

4. 若短时间内不再使用仪器，可直接关闭电源；长时间不使用时，应拔下电源线并覆盖防尘罩。

九、注意事项

1. 样品准备：确保样品均匀混合且无气泡，减少光学干扰。

2. 孔板选择：不同检测模式需选用透光性能匹配的孔板，如 UV 透射板用于核酸检测。

3. 温控：需要精确温度的实验应提前预热仪器，并确保样品同步进入检测。

4. 光源切换：不同模式下光源切换会影响测量时间，应在方法设定中提前考虑。

5. 防止交叉污染：尤其在高通量检测中，应更换吸头并注意样品间隔。

十、实验优化建议

1. 方法验证：首次使用新方法时，可先用少量样品进行预实验，验证参数设定是否合适。

2. 自动化配合：在大批量实验中，可配合自动化加样设备，减少人为误差。

3. 数据备份：检测结束后立即备份原始数据与分析结果，防止意外丢失。

4. 定期维护：定期清洁光学窗口、检查光源性能，并更新软件以获得最佳性能。

5. 对照设置：在每批实验中设空白、阴性和阳性对照，以便验证实验有效性。

总结

赛默飞酶标仪 Varioskan Flash 的实验流程涵盖了从前期准备、方法设定、样品加载、数据采集到结果分析的全链条。规范化操作不仅能确保数据准确性和重复性，还能延长仪器的使用寿命。熟悉每个环节的细节要求，并结合实验目的灵活调整参数，是提升检测质量和效率的关键。