一、Multiskan Ascent 酶标仪简介

Multiskan Ascent 是赛默飞公司推出的自动化微孔板酶标仪，广泛应用于生命科学研究、药物筛选、临床免疫检测和食品安全等领域。其集成高精度光学系统和智能软件操作平台，具有以下主要特点：

• 波长范围：340–850 nm

• 光源：卤素灯

• 孔板支持：96孔及部分384孔微孔板

• 检测方式：单波长、双波长、全波长扫描

• 支持模式：终点法（End-point）、动力学法（Kinetic）、光谱扫描法（Spectral scan）

理解并合理运用这三种运行模式，是提升实验效率、确保结果准确性的关键。

二、运行模式概览

Multiskan Ascent 酶标仪提供三种核心运行模式：

每种运行模式都需在软件中进行参数设置、布局定义和数据处理，下面分别进行详细介绍。

三、终点法（End-point Mode）

1. 原理简介

终点法即在某一固定波长下，对所有孔进行一次性吸光度（OD）读取，适用于反应终止后稳定状态下的检测，操作简单、读数快速，是最常用模式。

2. 参数设置

• 波长选择：常用450 nm（TMB显色）、570 nm（MTT）、630 nm（背景扣除）；

• 读取模式：单波长或双波长（主波长+参考波长）；

• 读取速度：标准、快速或精细模式（精度要求不同）；

• 板型设置：默认96孔板，可自定义板型模板；

• 背景值处理：指定空白孔自动扣除背景值。

3. 应用实例

• ELISA检测：设定主波长450 nm、参考波长620 nm，读取后进行标准曲线拟合；

• 蛋白定量（BCA、Bradford）：单波长读取562 nm或595 nm；

• 细胞增殖检测（MTT/XTT）：读取570 nm吸光值，结合标准品进行浓度计算。

4. 数据输出与处理

• 原始OD值导出；

• 自动计算平均值、标准差；

• 结合标准孔绘制标准曲线，输出浓度值；

• 支持数据导出至Excel、PDF、图形报表等格式。

四、动力学法（Kinetic Mode）

1. 原理简介

动力学模式通过设定时间间隔，在一定时间范围内多次读取孔中吸光度变化，捕捉反应进行过程，适用于酶促反应、药物释放等动态变化体系。

2. 参数设置

• 波长设置：单波长或双波长；

• 检测时长：可设置总检测时间（如60分钟）；

• 时间间隔：如10秒、30秒、1分钟；

• 读取频率：连续读取或定时间隔读取；

• 延迟启动时间：用于加样后反应启动缓冲（如30秒）；

• 震荡功能：反应前可设置混匀时间（如摇动5秒）。

3. 应用实例

• 酶活性检测：如乳酸脱氢酶（LDH）活性，以340 nm连续读取OD下降速率；

• 药物释放速率监测：每隔10分钟读取一次释放介质中OD值；

• 细胞实时代谢监测：以时间为横轴，绘制OD变化曲线；

• pH反应曲线跟踪：反应过程中颜色随pH变化，实时读取颜色变化速度。

4. 数据输出与处理

• 输出每个孔的吸光度-时间矩阵；

• 自动计算各孔斜率（ΔOD/min）；

• 支持非线性回归分析、Michaelis-Menten曲线拟合；

• 可导出动态图表或Excel表格用于进一步分析。

五、光谱扫描法（Spectral Scan Mode）

1. 原理简介

光谱扫描是指对某一孔样本在一定波长范围（如340~850nm）内进行逐步扫描，获取其完整的吸收光谱曲线，可用于筛选最佳检测波长或分析未知样本。

2. 参数设置

• 波长起止点：如340 nm ~ 800 nm；

• 步长：设定扫描间隔，一般为2 nm或5 nm；

• 目标孔选择：选定代表性孔进行扫描；

• 扫描速度：依据精度与效率进行选择；

• 重复次数：每孔扫描可设定重复扫描次数。

3. 应用实例

• 筛选显色底物检测波长：用于建立标准曲线前确定反应最佳波长；

• 未知样本波峰识别：获取样本特征吸收峰值位置；

• 反应时间窗口优化：扫描不同时间点的反应曲线确定稳定波长；

• 检测干扰峰：判断混合溶液中是否存在波长干扰。

4. 数据输出与分析

• 输出波长 vs 吸光度表格；

• 可自动绘制光谱曲线；

• 支持峰值识别、二阶导数分析等；

• 便于选取终点法检测的最佳波长。

六、不同模式下的实验设计要点

七、软件界面操作简述（以Ascent软件为例）

1. 新建实验模板

• 选择实验类型：End-point / Kinetic / Spectral；

• 设置孔板类型（96孔板）与孔位布局；

2. 测量设置

• 添加主波长和参考波长；

• 对应设置时间参数、扫描参数；

3. 数据处理配置

• 启用背景扣除、标准曲线拟合；

• 选择输出参数（平均值、斜率、最大值等）；

4. 运行与结果导出

• 启动测定；

• 导出 .csv、.xls、.pdf 格式报告。

八、运行模式常见问题与解决建议

九、实验优化建议

1. 终点法建议

• 所有孔加样时间间隔不超过5分钟；

• 使用双波长校正增强稳定性；

• 建立≥6个标准浓度点绘制标准曲线。

2. 动力学模式建议

• 起始延迟≥30秒；

• 重复次数≥2次以确保可重复性；

• 设置仪器震荡功能混匀反应物。

3. 光谱扫描建议

• 选择典型孔而非整板扫描；

• 设置扫描步长为2 nm可获得更精细峰值；

• 使用透明板避免色彩干扰。

十、总结

Multiskan Ascent 酶标仪具备多种运行模式，涵盖终点、动力学与全光谱检测三大功能，通过灵活设置各类参数，可适应多种科研与检测需求。掌握其运行原理、设置逻辑与数据分析方法，是实现实验成功的关键。

在实际应用中，应根据实验目的选择合适的模式，并规范操作流程、准确设置参数、及时处理数据，从而实现实验数据的高度可靠性与实验室检测工作的高效化。