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Thermo Scientific Multiskan EX 酶标仪是一款广泛应用于免疫学、分子生物学、细胞学等实验室领域的光度检测仪器，具备多波长读数能力、精确的光学系统、可编程检测参数等优势，尤其适用于ELISA、细胞增殖、蛋白检测等微孔板分析实验。
该设备可对96孔或384孔微孔板进行多波长检测，具有高灵敏度、低漂移、快速响应等特点。波长选择和设置是实验准确性的关键因素之一，正确理解和操作波长设置模块，对于实验质量有着决定性影响。
Multiskan EX 采用基于滤光片的单光束检测系统，其核心部件包括卤素光源、滤光轮、检测光电管等。其工作流程如下：
光源发出宽谱光。
滤光片选择所需波长范围（如450 nm、620 nm等）。
选定波长的光照射样本孔液。
被样本吸收后的透射光被探测器接收。
软件转换信号为光密度（OD）读数，单位通常为Abs。
滤光片的安装位于转盘结构中，一次检测最多可支持8种波长自动切换，也支持手动更换滤光片盒以扩展波长范围。
波长设置的目的是使光源通过匹配特定试剂吸光峰值的滤光片，以最大程度提升测量灵敏度和特异性。每一种检测反应（例如HRP-TMB反应、荧光底物反应等）都有其最适波长。
主波长（Primary wavelength）：是用于测量样品吸光度的核心波长。
参考波长（Reference wavelength）：用于修正背景噪音和板底不均匀性。
不同的底物具有不同的吸收光谱。例如：
| 试剂类型 | 推荐主波长 | 推荐参考波长 |
|---|---|---|
| TMB（HRP） | 450 nm | 620~630 nm |
| OPD（HRP） | 492 nm | 620 nm |
| ABTS（HRP） | 405 nm | 490 nm |
| pNPP（AP） | 405 nm | 无参考或492 nm |
| MTT/MTS（细胞） | 570 nm | 620 nm |
| SRB（细胞） | 540 nm | 690 nm |
Multiskan EX 默认配备一组常用滤光片，支持用户根据实验需要增减：
| 滤光片编号 | 中心波长（nm） | 带宽（±nm） | 用途示例 |
|---|---|---|---|
| F1 | 405 | ±10 | 酶活检测（pNPP、ABTS） |
| F2 | 450 | ±10 | ELISA（TMB） |
| F3 | 492 | ±10 | ELISA（OPD） |
| F4 | 540 | ±10 | SRB、蛋白检测 |
| F5 | 570 | ±10 | MTT、细胞毒性检测 |
| F6 | 620 | ±10 | 背景校正（参考波长） |
| F7 | 690 | ±10 | 高背景参考（细胞染色） |
用户可向厂商定制特殊波长滤光片，并更换波长模块。
打开酶标仪电源，连接至配套计算机。
启动 Ascent 软件（或相关控制软件）。
系统自检完成后，显示主菜单界面。
在菜单中选择“New Measurement Protocol”。
设定板型（如96-well）。
进入“Wavelength Setting”选项卡。
点击“Add Wavelength”添加波长。
从下拉列表中选择所需滤光片波长（如450 nm）。
若需使用参考波长，点击“Reference Wavelength”，选择如620 nm。
系统将自动识别当前设备滤光片盘中所含波长并提示可用项。
选择“End-point”或“Kinetic”检测。
设定读取时间点与间隔（动态检测需设置周期）。
调整光程校正、摇动时间、读板速度等参数。
点击“Save Protocol”，命名实验方案。
点击“Start Measurement”，插入微孔板开始读取。
选择参考波长有以下优点：
抑制背景干扰，如微孔板底部不均匀。
减少光源漂移对数据稳定性的影响。
增强数据重现性，尤其在细胞类实验中更为重要。
举例：使用TMB底物测定HRP反应时，推荐主波长为450 nm，参考波长为620 nm。
部分试剂在多个波段都有吸收，可设定两个主波长进行比值分析。例如，测定DNA纯度时，可设定260 nm与280 nm，同时读取后计算A260/A280比值。
注意：Multiskan EX 标准配置不支持小于340 nm的滤光片，因此不适用于核酸蛋白紫外检测。
避免盲选波长：所有波长设置应依据试剂说明书或验证曲线决定，切忌随意选择。
定期校准滤光片：使用时间过久的滤光片可能存在老化，影响准确性。
避免交叉干扰：若连续使用多个波长，需确保其间无光谱交叠。
保持设备清洁：光路区域清洁程度会显著影响检测精度，定期用无尘布清洁样本盘和光孔。
合理命名波长组合：创建实验模板时建议使用“450-620_ELISA_TMB”等命名，便于溯源与批间对比。
| 设置错误 | 可能后果 | 实验影响 |
|---|---|---|
| 主波长设错 | 无法检测真实反应吸光峰 | 数据偏低，误判实验阴性 |
| 无参考波长 | 背景干扰不被扣除 | 增加噪音，重复性差 |
| 波长重复选择 | 无实际修正作用 | 浪费资源、操作混乱 |
| 滤光片老化未更换 | 波段漂移、透过率下降 | 数据波动加大、不稳定 |
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 无法选择所需波长 | 滤光片未安装或识别失败 | 检查滤光盘，重新加载 |
| 参考波长不可选 | 软件版本限制 | 升级软件，使用兼容版本 |
| 光密度读数异常 | 波长设置错误或底物降解 | 重查波长、换新底物 |
| 多波长切换慢 | 滤光片转盘卡滞 | 清洁转盘，润滑轴承 |
| 读数差异大 | 波长未校准或光源老化 | 做标准曲线校验或更换灯泡 |
Multiskan EX 酶标仪凭借其多波长检测能力，为科研实验提供了极大的灵活性与可靠性。波长设置作为其核心操作环节，直接决定检测结果的准确性与实验的可重复性。无论是ELISA、细胞增殖，还是酶动力学分析，科学合理地选择和设置波长，是每一位操作者应当具备的基本素养。
建议实验室根据不同项目建立标准波长设置模板，并定期进行光学系统维护及波长响应验证，进一步保障数据质量。
杭州实了个验生物科技有限公司
