赛默飞酶标仪 Multiskan EX 校准步骤

一、设备简介

赛默飞（Thermo Scientific）Multiskan EX 酶标仪是一款经典的微孔板光吸收检测设备，广泛用于 ELISA、蛋白定量、酶活分析、细胞活性检测等实验。其检测精度直接依赖光学系统、波长选择、光源稳定性及信号处理的可靠性。
为了保证检测数据的准确性和可重复性，必须按照规范对仪器进行定期校准。

二、校准的必要性

1. 保证数据准确性

• 通过校准，使仪器测量值与标准值一致，消除系统性误差。

2. 延长设备寿命

• 校准过程中会检查光学元件、光源状态，及时发现潜在问题。

3. 符合实验室质量体系要求

• GMP、GLP、ISO17025 等体系均要求定期校准并记录。

4. 避免实验批间差异

• 保持不同时间段检测结果的一致性。

三、校准前准备

1. 环境准备

• 室温保持在 20–25℃，湿度 40–60%。

• 避免阳光直射和强气流干扰。

• 校准期间不进行其他强光或振动操作。

2. 仪器状态检查

• 确认电源线、接口线完好无损。

• 检查光路部分无明显灰尘、污渍。

• 光源（卤素灯或氙灯）点亮正常，无闪烁。

3. 校准工具

• 波长校准滤光片或标准滤光片组（带标定波长值）。

• 吸光度标准板（含不同已知透光率或吸光度的孔）。

• 光强校准板或透光度标准片。

• 温度校准探头（如带校准证书的温度计）。

• 原厂或第三方校准软件。

4. 记录准备

• 准备校准记录表格，记录每一步操作时间、参数和结果。

四、光学系统校准

光学系统是酶标仪的核心，涉及光源、准直镜、滤光系统和光电探测器。

1. 检查光源输出

• 使用光强测量装置检测光源输出稳定性，波动应小于±1%。

• 若光源衰减严重或光强波动大于允许范围，先更换光源再校准。

2. 清洁光路

• 用无尘布和无水酒精轻轻擦拭透镜、滤光片表面，防止划痕。

3. 光束对准

• 在维护模式中运行光束对准程序，确保光束垂直穿过微孔板中心。

五、波长校准

波长准确性影响吸光度的正确性，尤其在 ELISA 和酶动力学中至关重要。

1. 选择波长校准滤光片

• 该滤光片可在特定波长产生已知透射峰（如 405 nm、450 nm、492 nm、620 nm）。

2. 校准步骤

• 将波长校准滤光片放入样品架指定位置。

• 在软件中选择波长扫描模式，从 400–700 nm 范围扫描。

• 比较实测峰值波长与标称值的偏差，偏差应 ≤ ±1 nm。

3. 调整方法

• 若偏差超出范围，通过软件修正波长偏移参数。

• 调整后再次扫描，确认结果符合要求。

六、光强与零点校准

1. 光强校准

• 使用透光度标准板（如 90%、50%、10% 透过率孔）。

• 逐孔测量光强，确保各值与标准透过率换算的光强一致，误差 ≤ ±2%。

2. 零点校准

• 在空孔（无样品）条件下测量光强，设定为 100% 透过率（吸光度 0）。

• 确保所有检测通道的零点一致性，偏差 ≤ ±0.005 A。

七、吸光度准确性校准

1. 使用吸光度标准板

• 该板具有已知吸光度值（如 0.1 A、0.5 A、1.0 A、2.0 A）的固定孔。

2. 校准过程

• 按波长顺序测量标准板所有孔。

• 比较实测吸光度与标准值，偏差应 ≤ ±0.010 A 或相对误差 ≤ 1%。

3. 调整方法

• 在软件中输入标准值与实测值的对应关系，生成校准曲线系数。

八、温度校准（如带孵育功能）

1. 准备温度探头

• 使用可插入微孔板孔内的温度探头，带溯源校准证书。

2. 校准步骤

• 将孵育温度设定为 37℃（或其他常用温度点）。

• 待温度稳定 10 分钟后，读取探头实测值。

• 调整温度控制系统的偏移量，使实测值与设定值一致，偏差 ≤ ±0.3℃。

九、软件校准

1. 数据采集参数设置

• 检查波长、读数模式（单/双波长）、积分时间等。

2. 数据修正公式

• 软件内可设置背景扣除、参考波长修正等功能，应与实验方法匹配。

3. 版本更新

• 使用最新稳定版本软件，避免因算法错误导致校准失效。

十、校准记录与周期建议

1. 校准记录内容

• 仪器型号、序列号

• 校准日期、环境条件

• 校准工具型号、编号

• 校准前数据、调整后数据

• 操作人签名与复核人签名

2. 校准周期建议

• 日常检查：开机自检、光源亮度检查

• 每月：零点、光强、温度检查

• 每季度：波长准确性、吸光度准确性校准

• 每年：全套校准（建议由厂家或有资质的第三方执行）

十一、影响校准效果的因素

1. 光源老化

2. 滤光片污染或老化

3. 微孔板质量差异

4. 校准工具不准确或过期

5. 环境温湿度波动

十二、故障排查与注意事项

1. 波长偏差大

• 检查滤光轮定位是否正常

• 滤光片是否安装到位

2. 吸光度不稳定

• 检查光源稳定性

• 检查光路是否有灰尘或松动

3. 温度不准

• 检查加热模块和传感器

• 校准温度控制器

4. 注意事项

• 校准前后需记录完整数据

• 避免用未溯源的工具进行关键校准

• 调整参数需谨慎，保留原始值备份

十三、总结

赛默飞 Multiskan EX 酶标仪的校准是一项系统性工作，涵盖光学系统、波长、光强、零点、吸光度、温度等多个环节。严格按照标准步骤执行，并配合完整的记录与定期维护，能够确保仪器在长期使用中保持高精度和稳定性。这不仅符合质量管理要求，也能保障实验结果的科学性与可重复性。