赛默飞酶标仪 Multiskan EX 检测流程详解

一、前言

Thermo Scientific Multiskan EX 是一款经典的滤光片式酶标仪，广泛应用于生命科学、免疫学、生物制药、农业与食品检测等实验室领域。其核心功能为对微孔板内样本进行光密度（OD）检测，用于实现酶联免疫吸附试验（ELISA）、酶活性检测、蛋白定量、细胞活力分析等实验的定量结果获取。

正确掌握 Multiskan EX 的检测流程，对于实验结果的准确性、可重复性和实验室质量控制具有关键意义。本文将系统介绍该设备在日常实验中的完整检测流程。

二、检测流程总览

Multiskan EX 酶标仪的检测流程可分为以下七个阶段：

1. 仪器检查与初始化

2. 试剂与样本准备

3. 微孔板加样操作

4. 仪器参数设定与程序编辑

5. 读板操作与实时监控

6. 数据导出与结果处理

7. 故障排查与维护

以下将分步骤详细展开。

三、仪器检查与初始化

3.1 电源与连接检查

• 确保电源线稳固连接，插头接地良好；

• 检查仪器与控制计算机的数据连接线（一般为串口或USB）是否牢靠；

• 启动酶标仪主机，并观察自检过程是否正常；

• 打开上位机软件（如 Ascent 软件），确认仪器状态为“Ready”。

3.2 光源状态确认

• 光源为钨卤素灯，如连续使用超过1000小时需考虑更换；

• 若启动后屏幕显示“Low Signal”或读数波动异常，应检查光源老化与滤光片转盘运行状态。

3.3 滤光片配置

• 检查当前滤光片轮中所安装的波长（如450 nm、620 nm等）是否匹配所需实验；

• 若需更换滤光片，务必关机操作，并遵循设备说明书操作流程。

四、试剂与样本准备

4.1 试剂配置

• 按照试剂盒说明书或实验方案配制酶联试剂（如包被抗体、酶标二抗、底物液等）；

• 所有试剂应现配现用，避免因长期放置而降解或污染；

• TMB、OPD、PNPP 等底物需避光操作。

4.2 标准曲线制备（如适用）

• 配置不同浓度梯度的标准品，用于绘制标准曲线；

• 通常推荐设定7~10个点，形成线性或对数浓度范围。

4.3 样本预处理

• 生物样本（如血清、细胞上清等）需根据实验类型进行稀释或热处理；

• 避免样本中悬浮杂质、气泡等干扰光程。

五、微孔板加样操作

5.1 板型选择

• Multiskan EX 默认支持 96 孔平底微孔板；

• 确保所用微孔板底部干净透明，无残留、划痕或污染。

5.2 加样步骤

• 依次加入空白孔（Blank）、阴性对照、阳性对照、标准品与样本；

• 建议每一处理设定复孔（如重复3孔）提高数据可靠性；

• 加样后轻拍板底，消除液面气泡；

• 如有封板胶膜，贴紧边缘以防蒸发。

5.3 反应时间控制

• 所有孔反应时间应严格一致；

• 可设定计时器分批添加底物、终止液等；

• 保持恒温，避免室温变化对反应速度的影响。

六、仪器设置与程序编辑

6.1 启动控制软件

• 打开 Ascent 或兼容控制软件；

• 新建实验协议或载入既有模板（适用于批量操作）。

6.2 设置波长

• 主波长（如 450 nm）应与底物吸收峰匹配；

• 参考波长（如 620 nm）用于背景扣除，提高准确性；

• 系统会识别当前滤光片轮支持的波段。

6.3 设置检测模式

• End-point（终点法）：适用于ELISA类实验，测定反应结束时的OD值；

• Kinetic（动力学法）：适用于实时追踪反应过程，如酶活、速率分析。

6.4 调整其他参数

• 摇板时间（Shaking Time）：常设为5~10秒；

• 读取延迟（Delay）：常设为5~30秒，避免气泡干扰；

• 光路扫描速度（Fast/Normal）：根据样本颜色深浅设定。

6.5 设置孔位布局

• 使用“Plate Layout”功能标记各类孔类型（标准品、样本、对照）；

• 系统将据此输出自动统计与分析结果。

七、读数操作与监控

7.1 插入微孔板

• 打开仪器舱门，放入加样完毕的微孔板；

• 孔 A1 对齐标记方向（左上角）；

• 关闭舱门，确保密封良好。

7.2 启动检测

• 点击“Start Reading”，系统自动执行波长切换、孔位扫描；

• 读取过程中可实时观察各孔 OD 数据，动力学模式下可生成曲线；

• 读取完毕后系统提示“Reading Complete”。

八、数据处理与导出

8.1 数据初步处理

• 自动计算每孔OD值；

• 执行背景值扣除（参考波长或空白孔）；

• 统计重复孔平均值、标准差；

• 标注异常值或空值孔。

8.2 绘制标准曲线

• 若为定量实验，可在软件中拟合 OD-浓度标准曲线（线性或对数）；

• 使用拟合函数自动计算未知样品浓度；

• 可导出曲线参数（斜率、R²等）。

8.3 导出与报告生成

• 数据可导出为 Excel、CSV 或 PDF 格式；

• 报告包含实验名称、时间、波长设置、原始数据、处理结果、板图；

• 便于归档、复审或质量控制。

九、常见问题排查

十、实验室管理建议

1. 建立使用登记制度：记录每次使用人员、项目、时间、结果与问题；

2. 设备定期维护：

• 每周清洁舱门、检测窗口；

• 每月测试滤光片准确性与光源强度；

• 每半年校验标准孔板透光率；

3. 常用模板建立：

• 针对ELISA、MTT、酶动力学等项目建立波长与孔位布局模板；

• 减少重复输入，提升效率与一致性；

4. 数据归档制度：

• 所有读数文件应备份存档，便于追踪；

• 建议按实验编号或日期分类存储，命名规范清晰。

十一、总结

Multiskan EX 酶标仪作为一款成熟稳定的光度检测设备，其使用流程涵盖了样本准备、仪器参数设定、数据读取与结果处理等多个关键环节。熟练掌握每一步的操作技巧，能显著提升实验数据的可靠性、减少误差，并保障实验效率与实验室规范化运行。

建议实验人员结合本流程建立本单位标准操作规程（SOP），并定期进行设备维护与操作培训，确保该仪器持续发挥最大效能，服务于科研与检测任务。