一、适用与分工

1. 适用人员：完成培训与考核的实验人员。

2. 分工：使用者负责日常操作与台账；设备管理员负责维护与校准；安全员负责气瓶与用电安全。

二、安全提示

1. 使用独立接地插座，严禁带病运行与带电维护。

2. CO₂ 气瓶固定于墙/支架，远离热源，配专用减压阀与回火防倒吸装置。

3. 化学清洁剂选用中性或 70% 乙醇，避免强酸碱与含氯氧化剂长时间接触金属与密封件。

三、安装与环境准备（首次或移位后）

1. 摆位：水平坚固台面，背后与两侧各预留≥10 cm 通风间隙，避开空调冷风直吹、阳光直射与震动源。

2. 水套：开启上盖/注水口，缓慢注入去离子/蒸馏水至标线，排尽气泡并复位密封。

3. 湿度盘：清洗晾干后加注去离子/蒸馏水，按需加入合规抑藻剂（依说明浓度），置回底部定位处。

4. 气源：连接 CO₂ 软管，一级压力 0.6–0.8 MPa，二级稳压 0.02–0.05 MPa；全部接头涂肥皂水检漏，无气泡方可投入。

5. 电源：确认电压与铭牌一致，独立回路并可靠接地。

6. 内部附件：安装搁板，确认不遮挡风道与传感器。

7. 预消毒：用 70% 乙醇擦拭内胆、搁板与门封槽，门开通风 10–15 min，待干。

四、首次启动与基础设定

1. 通电自检：开机，确认面板自检通过、无报警。

2. 设定温度：进入设定界面，将温度设为 37.0 °C。

3. 设定 CO₂：设为 5.0%，确认注气阀工作正常。

4. 门加热：按季节与环境微调，避免门区凝露。

5. 报警上下限：依据工艺容忍度设置（如温度 ±0.5–1.0 °C、CO₂ ±0.5–1.0%）。

6. 预热稳定：空载运行 12–24 h，观察温度与 CO₂ 趋势进入稳态窄带。

五、基线校准（建议在首次或大修后进行）

1. 温度：将溯源温度计置于腔体中心，稳定 60 min 后读取，与面板对比；若稳定偏移，执行温度单点校准（或输入偏移值），记录前后数据。

2. CO₂：用独立 CO₂ 分析仪取样比对，按机型流程进行零/量程或单点校准；校后复核两次一致性。

3. 记录：形成“基线包”，包含设定、实测、偏移、波动度、均匀性与恢复时间。

六、日常开机与运行步骤

1. 班前检查
   a. 外观：门封完整、内门玻璃洁净、无积水与霉点。
   b. 水位：水套与湿度盘水位达标。
   c. 面板：温度与 CO₂ 在设定容差内，无报警指示。

2. 放样流程
   a. 在生物安全柜完成开盖、贴签与预处理。
   b. 打开外门，快速开启内门，整批放入标记清晰的容器，均匀分层摆放，不遮挡风道/探头。
   c. 先关内门再关外门，确认门封贴合；记录放样时间与层位。

3. 运行中观察
   a. 每班查看面板趋势与 Heat/注气指示是否与往常一致。
   b. 发现起雾/凝露，擦干并排查冷风直吹与门加热设置。
   c. 异常报警先静音，再按提示排查并记录。

4. 取样与补液
   a. 尽量在安全柜内完成开盖操作，减少箱内暴露时间。
   b. 单次开门≤30 s，操作前准备齐全，动作迅速。

5. 补水
   a. 湿度盘缺水立即补加去离子/蒸馏水；干燥季提高巡检频次。
   b. 禁止将开口溶剂、强挥发剂放入腔体。

七、CO₂ 气瓶更换步骤

1. 关闭箱体供气阀与旧气瓶阀门，缓慢泄压至零。

2. 拆下减压阀接头，装上新瓶并固定。

3. 缓慢开启瓶阀至一级 0.6–0.8 MPa，调二级 0.02–0.05 MPa，肥皂水检漏。

4. 打开箱体供气阀，观察面板 Inject 指示与 CO₂ 恢复曲线。

5. 记录更换时间、瓶号与压力。

八、开门干扰与恢复步骤

1. 标准干扰：开门≤30 s。

2. 恢复观察：关门后记录温度与 CO₂ 回到容差所需时间，如较历史中位延长＞20%，需查找原因。

3. 频繁操作时，将多项操作合并，减少开门次数；必要时调整批次节奏。

九、清洁与消毒步骤

1. 日清（每日）
   a. 擦拭外门把手、内门把手与常接触面。
   b. 清空可见积水与滴落点。

2. 周清（每周）
   a. 断电、关闭供气、清空样品与湿度盘。
   b. 取出搁板，用 70% 乙醇擦拭内胆、圆角与门封槽；自然干燥后复位。
   c. 湿度盘清洗晾干后加新水。

3. 月清（每月）
   a. 检查风道护罩与风机进风处积尘，清理但避免触碰传感器探头。
   b. 视情况更换抑藻剂，复核门加热与报警设置。

4. 污染处置（随时）
   a. 发现霉斑/可疑污染：立即停用，移出样品并隔离。
   b. 全面清洁擦拭，必要时执行高温循环或长时化学消毒。
   c. 干燥后复机，完成温度与 CO₂ 点检；空气沉降或拭子检测合格后再投入。

十、维护与校准步骤

1. 温度与 CO₂ 校准（每 6 个月或关键批次前）
   a. 预热稳态后，用溯源温度计与独立 CO₂ 分析仪逐项对比。
   b. 执行单点/多点校准，记录偏移与曲线。

2. 水套维护（3–6 个月）
   a. 放空旧水，检查内壁是否有水垢与腐蚀，必要时用合规方法去垢。
   b. 重新加注去离子/蒸馏水至标线。

3. 门封与铰链（每月）
   a. 检查密封条弹性与裂纹，清洁槽内残渣；衰减明显时更换。

4. 风机与通道（每季度）
   a. 听诊异响、查转速，清洁护罩积尘，确保回风与送风畅通。

5. 电气安全（每年）
   a. 绝缘与接地测试，通过后贴合格标识。

6. 备件管理
   a. 常备门封条、保险丝、搁板卡扣、软管与接头，建立更换台账。

十一、停机与复机步骤

1. 短停（≤72 h）
   a. 维持通电与低功率运行，或降至安全设定并标识“短停”。

2. 长停（＞72 h）
   a. 取出全部样品，关闭供气与电源。
   b. 放空水套与湿度盘，全面清洁并干燥，门留缝通风，外覆防尘罩。

3. 复机
   a. 参照“首次启动与基础设定”，缩减执行并做温度/CO₂ 点检与短时无菌监测。

十二、记录与追溯

1. 运行台账：日期、设定、实测、报警、清洁、维护、校准、放样/取样事件。

2. 验证档案：温度均匀性、波动度、恢复时间、CO₂ 稳态偏差等曲线与表格。

3. 触发 CAPA：一周内三次越限、恢复时间劣化＞20%、污染事件≥1 次，均需根因分析并形成纠正与预防措施。

十三、常见问题与快速处理步骤

1. 温度不稳
   a. 查门封与开门频率；移走冷风直吹；补足水套与湿度盘；清洁风道；必要时执行温度校准或联系维保。

2. CO₂ 波动大
   a. 检查漏气与稳压；做一次 CO₂ 校准；复核门加热与冷凝情况。

3. 冷凝/滴水
   a. 提高门加热、缩短开门、调整摆位避风；擦干冷点并加强日清周清。

4. 异味/可疑污染
   a. 立即停用，执行“污染处置”全流程，复核合格后再投用。

5. 报警频发
   a. 复核报警上下限是否过紧；确认传感器状态与供电稳定。

十四、操作要点速记卡（张贴设备旁）
• 开机顺序：电源→自检→气源→设定温度/CO₂→预热稳态。
• 放样原则：一次进出、≤30 s，先内门后外门，均匀摆放不遮风道/探头。
• 日常检查：温/CO₂ 指示、水位、门封、冷凝、报警记录。
• 周/月任务：周清内胆与湿度盘；月查风道与门封；季查风机；半年温度/CO₂ 校准。
• 异常处理：先静音→按提示排查→记录→必要时校准→验证恢复。
• 安全红线：气瓶牢固、独立接地、禁强腐蚀性清洁剂长时残留。

十五、量化目标与评估

1. 稳态偏差：温度控制在设定±0.2–0.5 °C，CO₂ 在设定±0.5–1.0%。

2. 波动度：温度 ≤±0.3 °C；CO₂ 趋势平稳无锯齿。

3. 均匀性：多点最大差≤0.5–1.0 °C。

4. 恢复时间：标准开门后回到容差的 P95 不劣于历史中位水平。

5. 台账完整率：100%，可追溯至人、时、层位与处置结果。