一、目的与适用范围
为保证赛默飞3131培养箱内温度、湿度与气体浓度稳定，降低交叉污染与操作风险，统一样品放置与管理方法，适用于本实验室在该设备内进行细胞培养、微生物培养及相关试验所涉及的一切样品与耗材。

二、术语与定义

1. 样品：指置入培养箱内的细胞、菌株、组织切片及其培养容器（培养瓶、培养皿、多孔板、离心管架等）。

2. 一次容器：直接接触培养基或样品的容器，如T-瓶、六孔板。

3. 二次容器：用于承托与防漏的托盘、周转盒或密闭盒。

4. 区域化管理：将箱内空间按层与左右三区划分为A/B/C区，固定用途与责任人，避免混放。

5. 危险样品：指带有抗生素筛选、未知污染风险、临床来源或易产生挥发性物质的样品。

三、职责分工

1. 设备管理员：制定与更新本规范，张贴布局图，监督执行，记录点检与清洁。

2. 使用人：遵守分区与标签规则，按预约放置与取出样品，完成台账记录与异常上报。

3. 质控专员：抽查放置密度、标签完整性、污染事件处置与追溯材料。

四、放置前准备

1. 设备状态确认：查看面板参数与报警记录，确保腔体已预热、气体与湿度处于设定范围，水盘洁净并加注无菌蒸馏水。

2. 腔体清洁度：前一日已完成内壁与搁板的常规擦拭；若近期有污染事件，须完成高温灭菌或化学消杀后再投入使用。

3. 样品预平衡：待入箱的培养瓶/板应提前在室温或温箱外预平衡，避免冷凝水与温度波动。

4. 容器完整性：确认瓶盖、透气膜、封口膜完好，必要时使用二次容器承托，防止渗漏。

5. 预约与登记：在使用看板或电子预约系统登记层位与区位、样品名称、负责人、放入时间与预计取出时间。

五、标签与台账

1. 标签内容：样品名或细胞系、传代号或批次、培养基与添加剂要点、放入日期、责任人缩写与联系电话、风险标识（如“抗生素+”“临床来源”）。

2. 标签位置：培养瓶置于侧面可见处；多孔板贴于短边侧面且不遮挡透气孔；培养皿贴于底部侧缘并保证堆叠可见。

3. 防潮材质：使用耐湿防脱落实验标签与耐酒精记号笔；禁用便签纸与普通胶带。

4. 台账要求：在台账中记录层位、区位、样品编号与关键参数，便于追溯与抽检。

六、空间分区与布局原则

1. 层位编号：自下而上编号为第1–N层；每层自左至右划分A/B/C三个区。张贴统一布局图于设备侧面与门内侧。

2. 功能分区：
   2.1 A区优先放置稳定、长期培养样品；
   2.2 B区作为公共短暂停放或高频操作区；
   2.3 C区用于高风险或抗生素筛选样品，必须使用密闭二次容器并标红。

3. 覆盖率控制：单层有效面积占用不超过70%，单件容器四周预留气流通道，边缘与内壁保持≥1–2 cm间隙。

4. 竖向间距：容器顶部与上层搁板保持足够余量，避免接触与划伤内壁或传感器。

5. 禁止遮挡：严禁容器贴靠后壁与传感器区域，不得覆盖气流回路与加湿水盘开口。

6. 重量与均布：重心低放、重量均匀分布，各层避免局部超载；液体较多的瓶类靠近层板中部摆放，并使用防滑垫或托盘。

七、容器摆放细则

1. T-培养瓶：瓶颈朝外，瓶底完全落在层板上；如为透气盖，确认松紧度在工艺允许范围，避免完全密闭或过度松动。

2. 多孔板：单层平铺，禁止超过两层堆叠；如需短时叠放，最多两块且间以低矮支架隔开，保证空气流通与读板可见性。

3. 培养皿：同尺寸皿可最多三层错位叠放，底部放置于二次容器，防止冷凝水滴落引发交叉污染。

4. 离心管架与试剂瓶：仅限临时预平衡与短时孵育，不得长期存放；须使用密闭盒承托并设置回收时间。

5. 贴壁与悬浮：同层避免混放贴壁细胞与强挥发性试剂孵育件；悬浮细胞优先放置在振荡或取放频率较低的区位。

6. 特殊工艺：抗生素筛选、药敏或应激处理样品须集中于C区并二次容器密闭；临床来源或未知状态样品单独一层或整区隔离。

八、开门与取放操作

1. 一次到位：取放样品前在操作台完成标记、检查与分组，缩短开门时间。

2. 开门角度与时间：仅开启必要角度，尽量控制在短时间内完成；连续多人操作时，采用批次取放并在间隙关闭门体。

3. 位置复位：取放后按原位复位，保持布局图与台账一致，避免他人误取。

4. 恢复观察：关闭门后观察参数稳定性，必要时记录恢复至设定范围所需时间，作为后续优化开门频次的依据。

九、湿度与冷凝控制

1. 水盘管理：维持清洁与适量液位，使用无菌水并按计划更换；补水时避免溅洒至层板与容器表面。

2. 冷凝预防：样品入箱前预平衡；避免将低温培养基直接置入；如发现容器内壁大量冷凝，暂停开门，待稳定后再操作。

3. 防滴漏：上层放置二次容器与吸水垫，防止冷凝滴落至下层样品；发生凝露水滴时，先移除受影响样品再进行擦拭与复位。

十、污染风险控制

1. 二次容器强制化：高风险与未知状态样品必须放入可密闭的二次容器，容器外再次张贴红色警示标签。

2. 分区隔离：不同项目、不同病原风险、是否含抗生素的样品严禁混放；必要时临时上锁或物理隔断。

3. 异常处置：发现异味、浑浊、霉点、胀盖、渗漏等迹象，立即封存该区位，按污染应急流程完成隔离、清洁与记录。

4. 个人防护：取放样品前后进行手消毒，必要时佩戴一次性手套并及时更换，避免触碰内壁与传感器。

十一、容量与排布计算（方法）

1. 估算原则：以每层不超过70%表面积覆盖率、相邻容器≥1–2 cm间隙为基准，结合容器外形尺寸计算理论容纳量。

2. 样品组合：优先同尺寸、同项目集中布置，减少混放导致的查找与误操作。

3. 冗余保留：每层预留至少一个空位，用于紧急转移或短时孵育，保证调度弹性。

4. 映射图更新：容量调整后第一时间更新门内侧布局图与电子台账，确保信息一致。

十二、常见容器情境要点

1. 96孔与384孔板：防蒸发边缘效应，采用外圈加缓冲液或专用边框板；取放动作轻缓，避免液面波动。

2. 透气膜封板：确认膜面朝上且平整无翘角，避免贴近内壁或水盘上方高湿区。

3. 密闭瓶类：短时孵育的有机溶剂或挥发性试剂瓶，须完全密闭并置于二次容器，结束后立即移出，不得长期留置。

4. 三气培养：如涉及特殊气体比例，整层独占与明确标识，避免他人误开或移动。

十三、清洁与点检

1. 日常：每次使用后擦拭层板残液与水渍，检查标签与位置；记录当日开门次数与异常。

2. 每周：清空水盘与加注新无菌水，擦拭内壁与门封条，检查排水口与传感器可视区是否洁净。

3. 每月：进行一次深度维护（依设备规程），并核对布局图、分区标识与容量设定。

4. 点检记录：采用标准表单记录清洁项目、时间与执行人，作为稽核与追溯依据。

十四、异常与偏差管理

1. 参数波动：若温湿度或气体浓度恢复时间明显延长，评估是否因放置密度过高、遮挡回风或开门频次过多，按先后顺序调整。

2. 渗漏事件：立即以二次容器整体转移，关闭该层使用，清洁消毒后更换层板或高温灭菌，再恢复使用。

3. 误放与混放：一经发现，立刻纠偏并补充台账与标签；对责任人进行再培训。

4. 警报处理：出现报警时先关门稳定，再根据提示逐项排查；不得在报警未解除时继续新增样品。

十五、培训与稽核

1. 上岗培训：新使用人须完成设备使用、放置规范、污染应急三项考核，合格后方可独立操作。

2. 复训频率：每半年一次；发生污染或重大偏差后进行专项复训。

3. 稽核机制：质控专员每月抽查三项关键点（标签完整率、分区遵循率、覆盖率），将结果纳入个人绩效与设备利用评估。

十六、可视化与信息公开

1. 布局图：门内侧张贴当周布局图与区位编码；设备侧面张贴快速检查清单。

2. 电子台账：与预约系统同步，实时显示层位占用、人名与预计释放时间，避免冲突。

3. 颜色编码：A区蓝、B区白、C区红，标签颜色与台账一致，提升辨识效率。

十七、快速检查清单（上手即用）

1. 看面板：参数稳定、无报警。

2. 看水盘：干净、有无菌水、液位适中。

3. 看层板：不超70%覆盖、无遮挡回风与传感器。

4. 看标签：信息完整，颜色与分区一致。

5. 看容器：二次容器承托、无渗漏、无凝露异常。

6. 看台账：位置、编号、时间一致。

7. 看操作：取放一次到位、迅速关门、观察恢复。

十八、附则

1. 本规范为放置与管理底线要求，若与工艺文件或设备说明书存在差异，以更严格者为准。

2. 涉及特殊试验需求（如长时开门观察、非常规气体比例）须另行制定临时增补条款并经审批后执行。

3. 本规范由设备管理员每年至少复审一次，结合使用数据与偏差报告持续改进。

通过以上规范的统一执行，可在不增加操作负担的前提下实现培养箱内环境的稳定可控、样品放置的清晰可追溯以及污染风险的源头压降。建议各项目组结合自身容器尺寸与操作节奏，进一步细化层位配额与时间窗口，形成“布局图＋标签体系＋台账”的三位一体管理闭环，确保赛默飞3131培养箱高效、安全、可持续地服务于日常实验。