赛默飞分光光度计 NanoDrop Eight 操作步骤详解

一、引言

NanoDrop Eight 是 Thermo Fisher Scientific 推出的一款多通道超微量分光光度计，专为高通量检测设计。它能够在一次运行中同时检测 8 个样品，样品需求量仅需 1–2 微升，广泛应用于核酸、蛋白质以及带有荧光标记物的分子定量分析。掌握其详细操作步骤是确保实验结果准确可靠的关键。本章将从开机准备到结果导出，逐一解析操作流程。

二、操作前准备

1. 设备检查

• 确认仪器电源、显示屏及光学臂正常。

• 检查检测平台是否干净无残留液体。

• 检查八通道检测孔是否无尘、无划痕。

2. 环境要求

• 放置在稳固的实验台上，避免震动。

• 室温保持在 20–25℃，湿度适中。

• 避免阳光直射，保持干燥环境。

3. 样品准备

• 提前配制检测所需的核酸、蛋白质或其他样品。

• 使用去离子水或对应缓冲液作为空白对照。

• 样品浓度不宜过高，如超出范围需稀释。

• 移液器、无酶吸头、无核酸污染操作环境。

三、开机与初始化

1. 电源开启
   接通电源后按下开关键，设备开始自检。显示屏会自动加载主界面。

2. 预热光源
   初次开机或长时间未使用时，需预热 2–3 分钟以稳定光源。

3. 软件登录
   选择用户账号进入系统界面，方便保存和区分数据。

4. 基线校正

• 滴加 1–2 微升空白缓冲液于检测平台。

• 合上光学臂，选择“Blank”进行校正。

• 系统自动记录基线，保证后续结果准确。

四、样品检测操作步骤

1. 样品加载

• 使用移液器取 1–2 μL 样品，缓慢滴加在检测孔中央。

• 确保液滴覆盖检测窗口，避免气泡或液体外溢。

• 对于多样品检测，可依次加载 8 个孔位。

2. 检测模式选择

NanoDrop Eight 内置多种模式：

• 核酸模式：在 260 nm 检测 DNA、RNA 浓度。

• 蛋白质模式：在 280 nm 检测蛋白浓度。

• 全波长扫描：190–850 nm，获取完整光谱。

• 荧光染料模式：针对 Cy3、Cy5 等标记物。

用户根据实验需求选择相应模式。

3. 开始测定

• 合上光学臂，点击“Start”。

• 仪器自动进行扫描，单次测定约需 5–10 秒。

• 结果包括吸光度、浓度、纯度比值及光谱曲线。

4. 查看结果

• 浓度值：自动计算并显示。

• 纯度比值：如 A260/A280、A260/A230，帮助评估样品质量。

• 光谱曲线：直观展示吸收峰。

五、数据处理与导出

1. 保存结果

• 点击“Save”，结果自动存入系统存储器。

• 可按样品编号或日期进行命名。

2. 导出数据

• USB 接口导出：生成 Excel 表格或 PDF 报告。

• 网络接口导出：可直接传输至实验室服务器。

3. 批量处理

• 软件支持多样品曲线叠加对比。

• 自动生成统计报告，含平均值、标准差。

六、常见问题与解决措施

1. 检测值不稳定

• 原因：液滴未完全覆盖窗口或有气泡。

• 解决：重新取样，确保操作规范。

2. 纯度比值偏低

• 原因：样品中有盐类、蛋白或有机物污染。

• 解决：重新提取或纯化样品。

3. 浓度过高提示

• 原因：样品吸光度超出检测范围。

• 解决：稀释后重新检测。

4. 信号异常弱

• 原因：检测平台未清洁干净。

• 解决：用无绒纸或去离子水清洁窗口。

七、日常维护

1. 清洁

• 每次测量后立即清洁检测平台。

• 使用去离子水或 70% 乙醇清洗，防止残留。

2. 关机保养

• 长时间不使用应关闭电源。

• 建议覆盖防尘罩，避免灰尘进入。

3. 校准与检测

• 定期进行标准溶液检测，确认性能。

• 必要时联系厂家进行维护保养。

八、案例演示

1. RNA 检测
   滴加 RNA 样品 2 μL，结果显示浓度 150 ng/μL，A260/A280 值为 2.0，表明纯度良好。

2. 蛋白质检测
   检测 BSA 溶液，结果浓度 2.4 mg/mL，符合实验预期。

3. 多样品检测
   同时加载 8 个 DNA 样品，短时间内获得完整检测结果。

九、总结

NanoDrop Eight 的操作步骤简洁明了，主要流程包括：

1. 操作前准备与基线校正；

2. 样品加载与模式选择；

3. 自动检测与结果查看；

4. 数据保存与导出；

5. 清洁与维护。

其优势体现在：

• 样品体积极小，避免浪费；

• 八通道同时检测，大幅提高效率；

• 检测结果直观可靠，便于数据管理；

• 适用于核酸、蛋白质及多种标记分子。

通过规范的操作步骤，NanoDrop Eight 能够为科研人员提供高效、准确的实验数据，成为分子生物学和生物医学实验室的重要工具。