1. 校准的重要性

校准是确保分光光度计高精度测量的关键步骤。分光光度计通过测量样品在特定波长的光吸收来推算样品的浓度或其他特性。如果仪器的波长、吸光度或其他参数出现偏差，可能导致数据不准确，影响实验结果的可靠性。因此，定期校准能够确保仪器的性能始终处于最佳状态，尤其是在实验环境发生变化或长时间未使用之后。

GENESYS 180的校准可以分为以下几种类型：

• 波长校准：确保仪器能精确地选择和测量特定的波长。

• 吸光度校准：校准仪器的光强度，以确保测量结果的精确度。

• 光谱校准：确保光谱扫描过程中，仪器能够准确地显示样品的吸光度与波长之间的关系。

2. 波长校准方法

波长校准是分光光度计使用过程中最为基础的一项校准工作。GENESYS 180的波长精度高达±0.1 nm，但为了确保其精度，用户需要定期进行校准。波长校准主要是确保仪器的测量结果能够准确对应实际的波长值。

A. 校准标准

波长校准通常使用标准物质，这些物质具有已知的吸收峰，其峰值位置在标准文献中有详细记载。常用的波长校准标准包括：

• 水合苯酚溶液（常用于254 nm波长的校准）

• 氯化钠（NaCl，常用于增加仪器波长的参考）

• 氘灯（用于验证仪器的紫外波段精度）

B. 校准步骤

1. 准备标准样品：首先，准备合适的标准样品。对于紫外光区域，通常选择具有明确吸收峰的标准物质，如水合苯酚溶液。

2. 选择适当波长范围：打开GENESYS 180并选择适当的波长范围（通常为190 nm至1100 nm），设置扫描模式为单波长或全光谱扫描。

3. 空白校准：在进行波长校准前，必须进行空白校准。空白样品通常为溶剂或纯净水，用于消除容器和溶剂对测量结果的影响。

4. 进行波长扫描：将标准样品放入比色皿槽，选择波长范围进行扫描。仪器会根据样品的吸收特性显示波长的吸光度曲线。

5. 比较标准吸收峰：在扫描结果中，比较标准物质的吸收峰与已知吸收峰的位置。如果出现偏差，进行手动波长调整。

6. 调整波长：根据标准物质的吸收峰位置，进行必要的波长调整。GENESYS 180提供了自动波长校准功能，若存在较大偏差，用户可以手动校正波长。

C. 注意事项

• 在校准过程中，确保标准物质和比色皿的清洁，以避免污染和误差。

• 使用新鲜配制的标准溶液，确保其浓度和质量稳定。

• 校准后，应保存波长校准结果，以便今后使用。

3. 吸光度校准方法

吸光度校准确保了仪器的光强度准确，能够确保不同样品的吸光度测量结果的一致性。GENESYS 180的吸光度精度通常为±0.002 AU，通常可以通过使用已知吸光度值的标准溶液来进行校准。

A. 校准标准

常用的吸光度校准标准包括：

• 水溶液：如纯水，通常用于检查仪器的零点校准。

• 已知浓度的溶液：如重铬酸钠溶液或其他具有已知吸光度的标准溶液。

• 标准比色皿：如果需要，可以使用已知吸光度的标准比色皿进行校准。

B. 校准步骤

1. 空白校准：首先，使用溶剂或水进行空白校准，以消除溶剂或样品容器的光学效应。

2. 配置标准溶液：准备浓度已知且吸光度明确的标准溶液（例如1.000 AU的标准溶液）。确保标准溶液的浓度符合仪器的量程范围。

3. 测量标准溶液：将标准溶液装入清洁的比色皿中，并置于仪器的样品槽中，进行吸光度测量。

4. 记录结果：仪器将自动显示标准溶液的吸光度。比较其结果与标准值是否相符。

5. 调整吸光度：若测量结果与标准值有偏差，可以通过调整仪器设置中的吸光度校准功能进行校正。

6. 确认准确性：校准完成后，进行多次测量以确保吸光度的准确性。如果偏差较大，则需要重复校准过程。

C. 注意事项

• 选择适当浓度的标准溶液，确保其吸光度在仪器的线性范围内。

• 确保比色皿的清洁与干燥，避免残留物干扰测量结果。

• 在不同温度下进行测量时，应考虑温度对吸光度的影响，必要时调整温度以进行校准。

4. 光谱校准方法

光谱校准是确保分光光度计能够准确地扫描光谱范围，并正确显示样品的吸光度与波长之间的关系。GENESYS 180支持多种光谱扫描模式，用户可以根据需要进行光谱校准，以确保扫描的精度。

A. 校准标准

光谱校准通常使用标准光源进行：

• 氘灯或钨灯：用于测试紫外和可见光范围的光谱响应。

• 光谱参考物质：如某些化学品的光谱数据已知，可以用于比较仪器的光谱响应。

B. 校准步骤

1. 打开仪器并选择光谱扫描模式：设置仪器的扫描模式为全光谱扫描，选择扫描波长范围。

2. 使用空白溶液进行校准：首先进行空白校准，确保在测量过程中溶剂和容器的干扰最小化。

3. 进行全光谱扫描：使用氘灯或钨灯进行光谱扫描，记录仪器的光谱响应。

4. 对比参考光谱：将扫描结果与已知的光谱参考数据进行对比，检查仪器的光谱扫描精度。如果发现偏差，手动调整光谱扫描设置。

5. 光谱校准调整：如果存在显著的偏差，可以通过仪器的校准程序进行光谱响应调整，以确保扫描结果与标准光谱匹配。

C. 注意事项

• 光谱校准要求在稳定的环境下进行，避免温度、湿度变化对光谱响应产生影响。

• 定期检查光源的稳定性，确保其不会因衰减或老化影响校准结果。

5. 校准后的检查与验证

完成波长校准、吸光度校准和光谱校准后，用户应对仪器进行验证，以确保所有校准步骤有效。通常的验证步骤包括：

• 验证波长精度：使用多个标准样品，验证波长测量是否准确。

• 验证吸光度一致性：使用已知浓度的溶液，检查吸光度测量的重复性和一致性。

• 验证光谱响应：进行多次光谱扫描，并与标准数据进行对比，确保仪器的光谱响应稳定。

6. 常见问题与解决方法

在校准过程中，用户可能会遇到一些常见问题，以下是解决这些问题的一些方法：

• 波长校准不准确：可能是标准物质选择不当或光源老化。建议使用新的标准溶液，检查光源是否需要更换。

• 吸光度测量不准确：通常是比色皿或溶液不洁净，或者样品浓度过高或过低。确保比色皿清洁，调整样品浓度。

• 光谱扫描偏差：可能是光源不稳定或光学系统出现故障。定期检查光源并确保光学系统的清洁。

7. 总结

赛默飞GENESYS 180的校准工作对于保持仪器的高精度至关重要。通过定期进行波长校准、吸光度校准和光谱校准，可以确保仪器始终处于最佳的工作状态，避免因仪器误差导致实验结果不准确。按照正确的步骤进行校准，及时检查和维护设备，可以有效延长仪器的使用寿命，并提高实验数据的可靠性。