赛默飞分光光度计 BioMate 160 液体试剂使用详解

一、前言

分光光度法是一种利用物质对特定波长光的吸收特性来进行定量或定性分析的重要方法。在这一过程中，液体试剂的选择与使用至关重要。赛默飞分光光度计 BioMate 160 作为一款高性能的 UV-Vis 仪器，广泛应用于核酸、蛋白质、酶学反应、药物分析、环境检测等多个领域。为了确保实验结果的准确性与重复性，科学、规范地使用液体试剂是必不可少的环节。

本文将从 液体试剂分类、配制原则、常见试剂使用场景、操作步骤、注意事项与案例分析 等方面，全面解析在 BioMate 160 上进行实验时液体试剂的使用规范。

二、液体试剂的分类与作用

在使用分光光度计时，液体试剂通常分为以下几类：

1. 缓冲溶液类

• 常见如 Tris-HCl、PBS（磷酸盐缓冲液）、乙酸缓冲液。

• 用途：调节并稳定溶液的 pH，避免被测物质降解或构象改变。

2. 显色试剂类

• 常见如考马斯亮蓝 G-250、茚三酮、二硝基苯酚等。

• 用途：与样品中的目标分子发生特异性反应，生成有色产物，从而实现定量。

3. 反应底物类

• 例如用于酶学反应的 ONPG、PNPP 等。

• 用途：通过酶促反应产生有色物质，便于光度检测。

4. 对照与标准溶液类

• 包括空白对照液、已知浓度的标准溶液。

• 用途：校正仪器基线、建立标准曲线，确保实验可比性。

5. 特殊分析试剂类

• 如用于核酸检测的 SYBR Green、用于金属离子检测的邻菲罗啉。

• 用途：扩展分光光度法的应用范围。

三、液体试剂的配制与保存原则

在分光光度实验中，液体试剂的配制与保存直接影响实验结果。

1. 配制用水

• 使用去离子水或超纯水，避免杂质离子或有机物干扰。

2. 浓度控制

• 严格按照试剂说明书或实验方案要求配置。

• 配制溶液时，应逐级稀释，避免浓度过高影响光学检测。

3. pH 调节

• 根据实验需求，使用 pH 计精确调整。

• 在核酸与蛋白检测中，pH 的偏差可能导致构象变化，影响吸光值。

4. 保存条件

• 缓冲液常温保存，一般可维持数周稳定。

• 显色剂需避光、低温保存，避免降解。

• 酶底物类试剂通常需要 -20℃ 保存，临用前解冻。

四、常见应用场景及液体试剂使用方法

1. 核酸定量分析

• 原理：核酸在 260 nm 处有特征吸收峰，A260 值与浓度成正比。

• 试剂使用：

• 缓冲液：一般选用 TE 缓冲液（Tris-EDTA），避免金属离子对核酸稳定性的影响。

• 空白对照：TE 缓冲液作为 blank，校正仪器基线。

• 注意事项：

• 确保样品溶液透明无杂质。

• A260/A280 比值应在 1.8–2.0 之间，表明核酸纯度较高。

2. 蛋白质浓度测定

• 常用方法：

• 紫外吸收法（280 nm）：不需显色剂，直接检测芳香族氨基酸吸收。

• Bradford 法：利用考马斯亮蓝 G-250 显色。

• 液体试剂：

• Bradford 试剂现用现配，需避光保存。

• BSA（牛血清白蛋白）作为标准溶液。

• 使用步骤：

1. 在比色皿中加入显色试剂。

2. 加入待测样品，混匀后反应。

3. 在 595 nm 处测定吸光度，绘制标准曲线。

3. 酶活性测定

• 常用底物：ONPG、PNPP。

• 试剂使用：

• 缓冲液提供稳定 pH。

• 底物溶液需现配，避免自发分解。

• 检测方法：

• 测定酶反应生成产物的吸光度变化，常见检测波长 405 nm、420 nm。

4. 环境水样检测

• 常见项目：氨氮、总磷、重金属离子。

• 液体试剂：

• 例如纳氏试剂用于氨氮显色，钼酸铵用于总磷显色。

• 操作注意：

• 显色剂多为强酸或强氧化剂，操作需佩戴防护手套。

• 标准溶液需新鲜配制，以保证线性关系准确。

五、液体试剂使用的标准化操作流程

1. 准备阶段

• 检查试剂标签与有效期。

• 将所有试剂恢复至室温，避免温度梯度影响反应速率。

2. 配制阶段

• 使用容量瓶、移液枪，保证体积精确。

• 记录配制日期及批次。

3. 检测阶段

• 先用空白对照液调零，确保基线准确。

• 样品与标准溶液应同步操作，保证可比性。

4. 数据分析

• 使用标准曲线法计算浓度。

• 对于核酸、蛋白检测，需结合比值判断纯度。

六、常见问题与解决思路

1. 吸光度过高

• 样品浓度过大，应稀释后重测。

2. 显色不均匀

• 混匀不足，需在反应前充分振荡。

3. 背景值偏高

• 比色皿污染或显色剂降解，应更换比色皿和新鲜试剂。

4. 重复性差

• 可能由移液误差或反应时间控制不一致引起。

七、实验安全与规范

1. 试剂管理

• 危险性试剂（如浓酸、显色剂）应单独存放。

2. 操作安全

• 佩戴护目镜、手套，避免皮肤直接接触。

3. 废液处理

• 分类收集，按实验室安全规程处理。

八、典型案例分享

1. DNA 纯度检测

• 研究人员使用 TE 缓冲液溶解 DNA，结果 A260/A280 = 1.85，表明蛋白污染较少，适合后续 PCR。

2. 蛋白定量实验

• 通过 Bradford 法绘制标准曲线（BSA 0–1 mg/mL），样品在 595 nm 处吸光度为 0.35，对应蛋白浓度约 0.5 mg/mL。

3. 水质检测

• 使用纳氏试剂测定氨氮浓度，显色明显，吸光度随浓度增加呈良好线性。

九、总结

液体试剂在 BioMate 160 的使用过程中扮演着不可替代的角色。正确的试剂选择、规范的配制方法、科学的保存措施，以及严谨的操作流程，都是确保分光光度法实验可靠性的关键。通过对常见应用场景的掌握与常见问题的解决，科研人员能够更高效地利用 BioMate 160 完成核酸、蛋白、酶学及环境样品的检测任务。

未来，随着实验需求的拓展和新型显色剂的发展，BioMate 160 的液体试剂使用也将更加多样化与精准化，为科研与检测提供更加广阔的空间。