赛默飞分光光度计 NanoDrop Eight 检测步骤

一、仪器概述

NanoDrop Eight 是赛默飞（Thermo Fisher Scientific）开发的一款多通道微量分光光度计，能够同时检测多达 8 个样品，适合核酸、蛋白质和寡核苷酸等样品的定量与纯度分析。其核心优势是微量样品检测（仅需 1–2 µL）、高通量、多模式选择以及快速出结果。相比传统比色皿分光光度计，它更加节约样本和耗材，检测效率显著提升。

为了获得可靠的检测数据，正确掌握 NanoDrop Eight 的检测步骤尤为重要。

二、检测前准备

1. 仪器状态检查

• 开机后检查主机和检测平台是否清洁。

• 确认光学窗口无灰尘、水渍或残留物。

• 检查电源是否稳定，避免在电压波动环境下运行。

2. 光源与系统预热

• NanoDrop Eight 采用氘灯与钨灯组合光源，开机后需等待数分钟，以保证光源稳定。

• 预热时间通常为 5–10 分钟，不宜过短。

3. 软件与方法选择

• 启动配套软件，根据实验类型选择检测模式（核酸、蛋白质、寡核苷酸或自定义方法）。

• 若为定量实验，可预先设置标准曲线参数。

三、样本制备要求

1. 体积要求

• 每个通道需 1–2 µL 样本。

• 若体积不足，可能无法形成完整液滴，导致检测失败。

2. 浓度范围

• DNA：2–15,000 ng/µL

• RNA：2–5,000 ng/µL

• 寡核苷酸：2–5,000 ng/µL

• 蛋白质（A280 法）：0.1–100 mg/mL

3. 纯度要求

• 核酸 A260/A280 比值应在 1.8–2.0 之间。

• RNA A260/A280 理想值为 2.0 左右。

• 蛋白质检测缓冲液需避免在 280 nm 附近有强吸收。

4. 样品处理

• 确保溶液澄清，无沉淀或颗粒。

• 检测前充分混匀，避免浓度分层。

• 对 RNA 样本需使用 RNase-free 器材，避免降解。

四、检测步骤

步骤一：平台清洁

• 用无绒纸或专用擦拭布蘸去离子水，清洁检测平台。

• 确保光学窗口表面无尘粒和残液。

步骤二：空白参比

• 在检测平台上加 1–2 µL 对照缓冲液，关闭压杆进行检测。

• 软件会自动记录参比值，作为后续样本计算的基线。

步骤三：加载样品

• 将待测样本移取 1–2 µL 加至检测平台。

• 确保样本液滴覆盖光学窗口，无气泡。

• 加样顺序应保持一致，避免交叉污染。

步骤四：检测运行

• 关闭压杆，软件开始自动检测。

• 检测过程仅需数秒，结果将实时显示在界面上。

步骤五：数据记录

• 系统会显示浓度值、A260/A280 比值、A260/A230 比值及完整光谱曲线。

• 用户可选择导出数据或直接生成检测报告。

步骤六：平台清洁

• 每次样本检测后，应立即用去离子水清洗光学窗口。

• 避免残留物干燥附着在检测平台上。

五、数据处理与结果解读

1. 核酸检测

• DNA 浓度换算：A260 = 1.0 时，约等于 50 µg/mL。

• RNA 浓度换算：A260 = 1.0 时，约等于 40 µg/mL。

• 纯度判断：

• A260/A280 = 1.8–2.0 表示核酸纯度较好。

• A260/A230 = 2.0–2.2 表示基本无有机污染。

2. 蛋白质检测

• A280 法：适合纯化蛋白。

• 染料法：如 Bradford 法，需绘制标准曲线。

• 纯度判断：若缓冲液有吸收干扰，应结合对照样本进行扣除。

3. 多通道结果管理

• 软件支持同时显示 8 个样本的检测结果。

• 可批量导出为 Excel 或 PDF 文件，便于保存与分析。

六、实验优化建议

1. 样品优化

• 高浓度样本应稀释后检测，以保持在仪器线性范围内。

• 对 RNA 样本，可加入保护剂以提高稳定性。

2. 操作优化

• 避免样本带入气泡，否则会影响光路。

• 检测顺序从低浓度到高浓度，减少交叉污染风险。

3. 数据优化

• 对重要实验，建议同时保存浓度值和光谱曲线。

• 对染料法实验，应使用同一批次试剂，避免批次差异。

七、常见问题及解决

1. 检测无结果或数值过低

• 可能原因：样本浓度过低或体积不足。

• 解决方法：增加样品浓度，确保加样体积足够。

1. 吸光度过高

• 可能原因：样本浓度超出检测范围。

• 解决方法：进行适当稀释。

1. 重复性差

• 可能原因：样本未混匀或平台未清洁。

• 解决方法：混匀后再检测，每次检测后及时清洁平台。

1. A260/A280 比值异常

• 可能原因：核酸样品中含蛋白质或酚。

• 解决方法：进一步纯化样品。

八、实验室管理与规范化操作

• 建立 SOP：实验室应制定 NanoDrop Eight 标准操作规程。

• 人员培训：所有使用人员需接受培训，熟悉操作流程。

• 使用记录：每次检测应记录样品编号、检测时间和浓度值。

• 维护保养：定期进行光学窗口检查和软件升级，确保长期稳定运行。

九、应用场景说明

1. 分子克隆实验

• 快速检测质粒 DNA 浓度，保证下游实验成功。

1. 转录组学研究

• 高通量 RNA 样本检测，提高测序前质控效率。

1. 蛋白质组学研究

• 多样品并行检测，提高蛋白质定量的效率和准确性。

1. 临床与药物开发

• 临床样品核酸检测，药物研发中蛋白质浓度监测。

十、总结

NanoDrop Eight 以其 微量样本检测、多通道高通量、操作简便、结果准确 的特点，为实验室核酸和蛋白质的定量检测提供了高效方案。通过规范的检测步骤，包括 仪器准备、样本制备、空白参比、加样检测、数据处理和平台清洁，用户能够获得可靠的实验结果。同时，结合实验优化和规范化管理，可以最大限度发挥 NanoDrop Eight 的性能优势，提升实验室的工作效率与科研质量。