赛默飞分光光度计NanoDrop Eight注意事项

一、前言

NanoDrop Eight是赛默飞推出的一款高通量微量分光光度计，具有一次同时测量8个样品、样品体积低至12 μL、波长覆盖190850 nm的优势，被广泛用于核酸、蛋白及其他生物样品的检测。虽然该仪器具有高度自动化与简便化的操作流程，但作为精密光学设备，合理使用与维护仍然十分关键。掌握注意事项能够帮助实验人员减少误差、延长仪器寿命，并提高数据的准确性与可重复性。

二、使用前注意事项

1. 环境要求

• 温度：保持在20~25℃，避免温度剧烈波动。

• 湿度：控制在60%以下，过高湿度可能导致光学器件受潮。

• 光照与震动：远离强光直射与震动源，避免外界干扰。

2. 电源条件

• 使用稳定电源，避免与高功率设备共用插座。

• 建议使用带稳压功能的电源插板，减少电压波动。

3. 仪器检查

• 开机后等待3~5分钟预热，使氙闪光灯稳定。

• 检查检测平台是否洁净，无残留液滴或尘埃。

• 确认样品臂运转正常。

4. 软件准备

• 提前设置数据存储路径。

• 检查软件是否为最新版本，确保功能完整。

三、样品处理注意事项

1. 样品浓度与体积

• NanoDrop Eight检测范围广，但仍需保证样品浓度在检测区间内。

• 对于浓度过高的核酸或蛋白，应进行稀释。

• 样品体积需严格控制在1.5~2 μL，避免过多或不足。

2. 缓冲液选择

• 避免使用含高浓度盐或有机溶剂的缓冲液，这些成分会在230 nm处产生干扰。

• 核酸样品推荐使用无RNA酶/无DNA酶水，蛋白样品推荐使用PBS或Tris缓冲液。

3. 样品状态

• 保证样品均一，无沉淀或絮状物。

• 检测前充分混匀，避免局部浓度差异。

• 上样时尽量避免产生气泡。

4. 空白对照

• 每次检测必须使用与样品一致的缓冲液作为空白，进行基线校正。

四、操作过程注意事项

1. 上样

• 使用移液器吸取样品，避免吸头内残留气泡。

• 将液滴准确置于检测平台中央。

• 不要让液滴接触到平台边缘，以免影响光路。

2. 关闭样品臂

• 液滴覆盖窗口后，应立即关闭样品臂，防止蒸发。

• 操作时力度适中，避免损伤平台。

3. 测定模式选择

• 根据实验目的选择合适模式：

• 核酸模式（260 nm）

• 蛋白模式（280 nm或显色法）

• OD600模式（细菌培养检测）

• 全光谱扫描模式（190~850 nm）

• 模式选择错误会导致结果不准确。

4. 多通道测量

• 同时检测多个样品时，保持样品上样体积一致。

• 建议顺序操作，避免因等待过久导致液滴蒸发。

五、数据解读注意事项

1. 核酸检测

• 260/280比值：1.8左右为DNA纯净，约2.0为RNA纯净。

• 260/230比值：2.0~2.2为理想范围，低于此值可能有盐或有机物污染。

2. 蛋白检测

• A280法：适合高纯度蛋白。

• 显色法：适合复杂体系，需要标准曲线。

• 光谱解读：若230 nm吸收过高，提示缓冲液成分干扰。

3. 细胞与菌液检测

• OD600值：用于判断细胞密度或细菌生长阶段。

• 样品需充分混匀，避免分层。

4. 全光谱扫描

• 可用于未知样品或质量控制。

• 异常吸收峰提示可能存在杂质。

六、维护与保养注意事项

1. 检测平台清洁

• 每次检测结束后，用无RNA酶水或70%乙醇清洁。

• 避免残留液滴干固在窗口上。

• 不可使用金属工具刮擦，以免划伤光学表面。

2. 光源与光学系统

• 氙灯寿命较长，但需避免频繁开关机。

• 如发现光谱漂移，应进行校准或联系厂家维护。

3. 软件与数据管理

• 定期备份数据，避免丢失。

• 建议实验室建立统一的数据命名与存档规范。

4. 长期存放

• 长期不用时，应断开电源，并用防尘罩覆盖。

• 保持环境干燥，避免光学部件受潮。

七、常见问题及经验总结

1. 信号不稳定

• 原因：样品蒸发、气泡、平台不干净。

• 经验：快速操作并保持平台清洁。

2. 样品浓度异常

• 原因：缓冲液干扰或稀释不当。

• 经验：检查缓冲液成分，必要时更换。

3. 多次测量差异大

• 原因：上样体积不一致或样品混匀不足。

• 经验：操作需规范，保持体积一致。

4. 光谱曲线异常

• 原因：样品纯度低或光路受污染。

• 经验：检查样品质量，必要时重新纯化。

八、良好实验习惯建议

1. 每次实验前后，养成清洁检测平台的习惯。

2. 样品检测尽量一次性完成，减少蒸发影响。

3. 对重要样品重复检测三次，取平均值。

4. 在科研工作中，保存完整光谱数据而非单一浓度值，便于后续分析与复查。

5. 建立实验室标准操作流程，统一数据命名与记录格式。

九、总结

NanoDrop Eight分光光度计以其快速、高效和灵敏的特点，在分子生物学实验中被广泛使用。然而，它是一台对操作细节极为敏感的精密仪器。使用者需在样品准备、上样操作、模式选择、数据解读和日常维护等环节严格遵循规范。通过总结和遵守上述注意事项，既能确保检测结果准确可靠，也能延长仪器使用寿命，提升实验室整体运行效率。