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Technical articles赛默飞7500实时荧光定量PCR仪详细介绍
一、仪器概述
赛默飞7500实时荧光定量PCR仪(Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System)是一款应用广泛的核酸定量分析平台,基于荧光检测技术对PCR扩增过程中的目标核酸进行实时监控与分析。该系统整合了精准的温控模块、灵敏的光学检测系统以及成熟的数据分析软件,适用于科研、临床、食品安全、环境监测等多个领域。
该仪器采用5通道光学系统设计,支持多重PCR反应,可以同时检测多种靶标,提高了实验效率。在操作流程方面,设备配合用户友好的软件平台,使整个实验从设计、运行到数据分析更加系统化和直观。
二、技术参数
光学系统
5个独立荧光通道,支持FAM、VIC、SYBR Green、ROX、TAMRA等多种常用荧光染料
高性能CCD检测器,具备高灵敏度和信号线性响应
高效滤光片切换机制,确保信号采集的准确性与重复性
温控系统
基于Peltier元件的温控模块
升降温速率约为1.6℃/秒
控温精度为±0.25℃,保证扩增过程的稳定性
样本通量
标准96孔板格式,支持多种通用PCR耗材
单次运行可同时处理96个反应体系,适合中等通量的实验需求
反应体积
推荐反应体积:10–30 μL
支持多种体积设定,满足不同试剂体系要求
软件功能
Applied Biosystems SDS软件支持定量分析、相对定量、基因表达分析、熔解曲线分析等
数据输出格式多样,便于与其他数据平台对接
实验过程实时监控,提供扩增曲线、标准曲线和Ct值信息
三、主要功能和应用场景
绝对定量与相对定量分析
通过标准曲线建立靶基因的浓度与Ct值之间的关系,实现准确定量
在无标准品情况下,通过内参基因对比实现相对定量
基因表达分析
应用于转录水平研究,可对不同条件下的基因表达水平变化进行监测
配合高质量引物设计和反转录体系,提高表达分析准确度
SNP分析和基因分型
利用TaqMan探针技术进行单核苷酸多态性检测
可进行等位基因识别和样本分型,适合遗传研究和个体化医学
病原体检测与载量分析
适用于临床诊断实验室中对病毒、细菌等病原体的快速检测
能在早期感染阶段提供检测依据,有助于疾病预警与防控
食品与环境检测
检测转基因成分、致病菌残留、过敏源等
在水质检测、土壤微生物分析等环保项目中也有良好适应性
四、操作流程简介
样品准备
提取DNA或RNA样品并进行质量评估
进行反转录反应(如有需要),合成cDNA
反应体系配制
配制PCR反应液,包括引物、探针、酶、缓冲液和模板
分装入96孔板,封板后离心去除气泡
仪器设置与运行
打开SDS软件,设定扩增程序和检测通道
加载样本并启动反应程序
数据分析
采集并分析扩增曲线,获取Ct值和标准曲线
导出分析报告,进一步做统计或图表处理
五、优势特点
操作界面直观
软件操作简洁,实验流程明晰,有助于新手快速掌握使用技巧。
结果可靠性高
仪器具备良好的稳定性和重复性,适用于长期批量实验。
多通道检测
一次运行可完成多重靶标检测,节约时间和样本资源。
维护便捷
设备结构设计合理,日常维护工作量小,延长使用寿命。
六、维护与注意事项
日常维护
定期擦拭光学部件,防止尘埃影响信号检测
避免强光直射仪器,保持室内恒温环境
检查Peltier元件工作状态,避免过载运行
使用注意事项
正确选择荧光染料和通道,避免信号交叉干扰
使用专用PCR耗材,确保热传导与荧光透明度
实验前做好模板与反应体系的充分混匀,减少误差
七、适用领域举例
医学研究:肿瘤标志物、病毒检测、突变筛查
分子生物学:基因表达调控、功能基因筛选
农业科学:转基因检测、病害早期监控
法医学:DNA指纹、样本溯源分析
八、结语
赛默飞7500实时荧光定量PCR仪在多个科研和应用领域中展现出良好的性能表现,其稳定的检测平台和完善的数据处理功能为用户提供了可靠的核酸检测方案。尽管随着技术的发展,更新型号不断推出,但7500系统依然凭借其成熟的设计和广泛的用户基础,在众多实验室中发挥着重要作用。