Thermo Fisher(赛默飞)Countess 3 FL细胞计数仪——光立方与GFP检测的结合
Countess 3 FL细胞计数仪与光立方概念
赛默飞的Countess 3 FL细胞计数仪是一款高度智能化、支持多通道荧光检测的自动细胞计数仪。光立方(Light Cube) 是该仪器中的一个核心技术组件,用于支持多种荧光染料的高效检测和分析。光立方内置了激发光源和荧光滤光片,能够针对特定荧光信号(如 GFP)进行灵敏捕获和分析。
GFP(Green Fluorescent Protein,绿色荧光蛋白) 是荧光生物标记中的分子,广泛应用于基因编辑、细胞转染和标记特定细胞亚群等实验。
Countess 3 FL通过其光立方技术,可以精准检测 GFP 发出的绿色荧光信号,实现对 GFP 标记细胞的高效筛选与计数。
光立方的原理与功能
光立方是Countess 3 FL仪器中负责荧光检测的核心模块。它包括以下两个关键部件:
激发光源:
为荧光染料提供激发能量,常使用LED作为激发光源。
GFP的激发光波长范围为 470 nm(蓝光)。
荧光滤光片:
用于选择性捕捉荧光染料发射的特定波长。
GFP的发射光波长为 510 nm(绿色光),光立方会精准过滤出这一波长的荧光信号。
光立方的特点:
灵活性强:不同的光立方可对应不同的荧光标记染料(如 GFP、RFP、DAPI 等),用户可以根据实验需求进行快速更换。
精确性高:每个光立方经过严格校准,能够高效分辨微弱荧光信号。
易操作:光立方模块的插拔设计简单,用户无需复杂调整即可完成更换。
GFP检测的应用场景
GFP作为标记蛋白,常用于以下实验场景,而Countess 3 FL的光立方技术能够提供高灵敏度的检测支持:
1. 转染效率评估
在基因编辑或转染实验中,科研人员通常会使用 GFP 作为报告基因。Countess 3 FL能够:
精确计数 GFP 阳性细胞的数量。
快速计算转染效率(GFP 阳性细胞数/总细胞数)。
2. 荧光标记细胞的筛选
通过 GFP 标记特定细胞亚群(如肿瘤细胞或免疫细胞),Countess 3 FL可快速识别 GFP 阳性细胞并输出数量比例,为细胞分选和后续实验提供数据支持。
3. 基因表达分析
GFP常用于监测目标基因的表达水平。Countess 3 FL结合其荧光检测功能,能够高效量化 GFP 表达的强度与细胞数量。
4. 细胞追踪与动态研究
在细胞追踪实验中,GFP用于标记细胞迁移或分化行为。Countess 3 FL的荧光模块能够捕捉标记细胞的实时状态,并提供数据分析。
Countess 3 FL的检测流程(以GFP为例)
样本制备:
将含有 GFP 标记的细胞样本制备为悬液,浓度推荐为 1 × 10⁵ 至 1 × 10⁷ 个细胞/mL。
根据实验需求,可加入台盼蓝进行活力分析。
样本加载:
使用专用计数载片,取 10 µL 样本并加载至载片中,确保样本分布均匀。
选择检测模式:
插入含 GFP 检测功能的光立方。
在仪器界面选择 GFP 通道(470/510 nm)进行荧光检测。
结果读取与分析:
仪器自动对样本进行图像捕获和荧光分析,显示 GFP 阳性细胞的数量和总细胞数。
系统自动计算 GFP 阳性比例,并生成数据报告。
数据存储与导出:
将实验结果通过 USB 导出为 Excel 文件或高清图像,用于后续分析或归档。
Countess 3 FL光立方支持的荧光染料
除了 GFP 外,Countess 3 FL还支持以下常见荧光染料:
RFP(红色荧光蛋白):检测波长范围为 535/615 nm。
DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚):用于染色细胞核,检测波长为 360/460 nm。
mCherry:另一种红色荧光蛋白,常用于与 GFP 组合实验。
科研人员可根据实验需求选择相应的光立方,并灵活切换不同的荧光检测模式。
技术优势总结
GFP检测的核心优势:
灵敏度高:光立方模块对 GFP 荧光信号的检测具有灵敏度,即使荧光信号较弱也能准确识别。
多功能性:不仅支持 GFP 标记检测,还可同时进行细胞计数和活力分析。
高效性:检测时间短,每个样本仅需几秒即可完成分析。
便捷性:光立方设计可快速更换,无需复杂的硬件调整。
高分辨率成像:支持高清细胞图像捕捉,实验结果更直观。
Thermo赛默飞 3FL细胞计数仪光立方应用领域
细胞生物学:研究细胞增殖、分化及迁移。
基因编辑与转染研究:评估转染效率、基因表达水平。
免疫学与肿瘤学:筛选 GFP 标记的免疫细胞或肿瘤细胞。
药物筛选:分析药物对 GFP 阳性细胞的影响。
Thermo赛默飞 3FL细胞计数仪光立方总结
赛默飞Countess 3 FL细胞计数仪通过其光立方技术和多通道荧光检测功能,为 GFP 标记实验提供了高效、精确、便捷的解决方案。这款仪器不仅提升了细胞计数和荧光分析的效率,还能满足各种复杂实验需求,是生命科学研究领域的实验室工具。