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CCK-8试剂盒 (Cell Counting Kit-8, 20T):高效便捷的细胞增殖与毒性检测工具
CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂盒。该试剂盒基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四氮唑钠盐)化合物,在细胞存活的情况下,通过细胞脱氢酶作用将WST-8转化为水溶性橙黄色甲臜(formazan)染料。生成的染料量与细胞数量成正比,因此可以通过测定吸光度来定量评估细胞增殖或毒性。
WST-8:WST-8是一种非放射性、无毒的四唑盐,在活细胞中被脱氢酶还原生成橙黄色甲臜染料。由于生成的甲臜染料是水溶性的,避免了传统MTT实验中使用有机溶剂的步骤,操作更加简便。
电子载体:该试剂盒中的电子载体促进了WST-8在细胞中电子转移过程的高效进行,从而确保了生成的甲臜量与细胞活性之间的线性关系。
CCK-8试剂盒广泛应用于评估细胞增殖情况,适用于多种细胞类型,包括癌细胞、干细胞和原代细胞等。其操作简单,灵敏度高,可快速获取结果,特别适合于高通量筛选实验。
该试剂盒也是评估药物、化学品和其他处理对细胞毒性影响的常用工具。通过测定药物处理后细胞活性的变化,研究人员可以确定药物的IC50值或其他毒性参数。
在药物研发过程中,CCK-8试剂盒被广泛用于初步筛选药物候选化合物。其高灵敏度和高通量特性使其成为药物筛选和药理学研究的理想选择。
使用CCK-8试剂盒进行细胞增殖或毒性检测的步骤如下:
细胞培养:将待测细胞接种在96孔板中,按实验需求设定细胞数量和培养时间。
添加试剂:根据说明书,将适量的CCK-8试剂添加到每个孔中(通常为10 µL/孔)。
孵育:将培养板放置在37°C、5% CO₂的孵育箱中孵育1-4小时。孵育时间可根据细胞类型和实验需求进行优化。
测定吸光度:使用酶标仪在450 nm波长处测定每个孔的吸光度值。吸光度值的大小与活细胞的数量成正比。
数据分析:将测得的吸光度数据进行分析,计算细胞增殖率或细胞毒性指标。
CCK-8试剂盒具有高灵敏度,适合检测低细胞数量的样本。其对多种细胞类型的广泛适用性使其成为细胞生物学实验的通用工具。
与传统的MTT试剂相比,CCK-8不需要额外的溶解步骤,生成的产物是水溶性的,实验过程无毒且更为环保。
该试剂盒操作简便,通常在2-4小时内即可获得检测结果,适合高通量实验和快速筛选应用。
孵育时间:孵育时间应根据细胞类型和实验需求进行优化,以确保获得线性范围内的吸光度读数。
保存条件:CCK-8试剂盒应存放在4°C避光保存,避免反复冻融以保持试剂的活性。
酶标仪校准:在使用酶标仪测定吸光度前,确保仪器已正确校准,以获得准确的测定结果。
在抗癌药物筛选实验中,研究人员使用CCK-8试剂盒评估了多种化合物对不同癌细胞系的抑制效果。通过测定吸光度变化,他们能够快速确定各化合物的IC50值,从而筛选出具有潜力的候选药物。
CCK-8试剂盒(20T)是一种高效、灵敏的细胞增殖和毒性检测工具,广泛应用于细胞生物学研究和药物筛选领域。其操作简单、结果可靠,是实验室中的检测手段。无论是在基础研究还是应用开发中,CCK-8试剂盒都能为实验提供准确、快速的结果,为科学研究的推进提供有力支持。